基于金芪降糖片药效物质的多指标成分质量控制的基础研究

金芪降糖片为治疗糖尿病前期新型中药，临床疗效确切。目前该制剂的企业质量标准为小檗碱的含量测定及小檗碱、绿原酸和黄芪甲苷的定性鉴别。从中医药传统观点出发，少数几个指标成分的定性、定量，难以真正控制中药复方制剂的功效。本课题拟遵循中药复方的整体性、协同性、多成分和多靶点作用的特点，从金芪降糖片的活性成分吸收、转运、靶向作用和代谢的全过程对其进行系统研究。应用多种细胞模型及糖尿病大鼠模型，借助现代分离分析技术并结合生物信息学、化学计量学、药效学等学科，建立金芪降糖片的化学成分指纹图谱、生物指纹图谱及药物代谢指纹图谱，发现化学指纹-生物指纹-药物代谢指纹的关系，鉴别指纹图谱的变化，通过与药效学数据进行综合比较，阐明与金芪降糖片活性相关的、符合多成分、多靶点协同作用特点的药效物质基础，为构建以药效物质基础研究为指导，以指纹图谱与多指标成分定量分析为手段的质量控制新体系提供科学依据。

金芪降糖片为治疗糖尿病前期新型中药，临床疗效确切。目前该制剂的企业质量标准为小檗碱的含量测定及小檗碱、绿原酸和黄芪甲苷的定性鉴别。从中医药传统观点出发，少数几个指标成分的定性、定量，难以真正控制中药复方制剂的功效。本课题遵循中药复方的整体性、协同性、多成分和多靶点作用的特点，从金芪降糖片的活性成分吸收、转运、靶向作用和代谢的全过程对其进行了系统研究。通过对金芪降糖片大鼠体内吸收入血的成分研究结果显示共检测到了16种原型成分吸收入血发挥药效，且各成分浓度在不同时间点呈动态变化；采用外翻肠囊法测定金芪降糖片在大鼠肠吸收的特性，结果表明6种生物碱及5种有机酸成分在不同肠段的吸收均为线性吸收，R2均大于0.9，符合零级吸收速率；对金芪降糖片与载体蛋白结合成分的研究结果显示金芪降糖片中9种成分与BSA、HSA和大鼠血浆蛋白结合作用明显，通过对比单用黄连和成方的生物碱蛋白结合率发现，前者的蛋白结合率高于后者（P﹤0.01），表明成方中使用金银花（黄芪）配伍后可降低黄连生物碱与蛋白的结合，提高生物碱的游离浓度，有助于改善黄连生物碱的生物利用度，提高药效；通过选用涉及2 型糖尿病病理生理关键环节的胰岛细胞，3T3-L1前脂肪细胞，L6-成肌细胞和肝细胞为靶细胞，对金芪降糖片的活性成分进行筛选。结果显示，HepG2、INS-1、L6和3T3-L1细胞与黄连碱中大的6种黄连生物碱成分均有结合，说明黄连生物碱为主要降血糖药效成分；2种有机酸及黄芪甲苷成分与INS-1细胞有结合，推测这三种成分可改善胰岛细胞功能，促进胰岛素分泌，从而降低血糖；采用HPLC法建立了金芪降糖片的化学指纹图谱；根据金芪降糖片化学指纹图谱与吸收、转运、与靶细胞结合的化学成分图谱比较，发现金芪降糖片中主要发挥药效的成分可能为6种生物碱及6种有机酸，基于上述的研究，建立了HPLC法同时测定金芪降糖片中6种生物碱、同时测定6种有机酸及3种黄酮类成分的含量的方法。.综上所述，通过运用科学手段，从金芪降糖片的吸收、转运，与靶细胞结合等方面进行了研究，初步明确了金芪降糖片在体内发挥药效的有效成分及配伍使用的合理性，为建立以药效物质基础为指导，以指纹图谱与多指标成分定量分析为手段的金芪降糖片质量控制新体系提供了科学依据。.本课题现发表论文6篇，培养硕士研究生5名，其中4名已毕业，1名在读。