miR-30a 靶向调控足细胞中糖皮质激素受体α提高激素敏感性的分子机制

Glucocorticoids(GCs) are the most effective first-line therapy in the treatment of massive proteinuria. Podocytes injury can be found in glomerular diseases presented with massive proteinuria. GCs interact with the specific receptors Glucorticoid receptor (GR) to exert profoud effects. GRα is the functionally active isoform, located in cytoplasma. Our previous study demonstrated that the decreased expression of GRα in podocytes of patients with nephrotic synrdome who had been believed to contribute to glucocortiocid insensitivity, so it was worth lucubrating the factors affecting glucocortiocid responsiveness by regulating GRα activity. Our recent study showed that endogenous miR-30a downregulated GRα mRNA and protein level in murine podocytes. In this study, we explore the influence of GRα on glucocortiocid responsiveness during the restoration of podocyte injury from the molecular, in vivo and in vitro levels. Subsequently we further investigate the targrting regulation on glucocortiocid sensitivity through miR-30a-GRα-p38MAPK pathway. The prospective results may reveal the new molecular regulator of glucocortiocid resistance at the posttranscriptional level. Meanwhile our finding may serve as a potential predictable and therapeutic target.

糖皮质激素是治疗大量蛋白尿的经典药物，以大量蛋白尿为主要临床表现的肾小球疾病常伴有明显的足细胞形态和功能的异常。激素的作用是由特异的糖皮质激素受体（Glucocorticoid Receptor, GR）所介导的，其中GRα是发挥作用的主要亚型。课题组前期的临床研究结果发现激素不敏感的肾病综合征患者足细胞中GRα表达下降，因此探寻调控GRα活性的因子并深入研究其影响激素疗效的作用机制具有潜在的临床治疗价值。课题组发现足细胞中内源性靶基因miR-30a对GRα存在负性调控作用，本课题拟从分子、细胞和动物整体三个层面，揭示在足细胞损伤和修复过程中GRα表达变化对激素治疗反应的影响；同时利用miR-30a为干预靶点，进一步解析miR-30a-GRα-p38MAPK通路对激素敏感性的靶向调控作用。预期的研究成果可以发现在转录后水平影响激素治疗反应的调控因子，并可能成为预测和干预的潜在靶点。

临床研究结果表明原发性肾病综合征患者足细胞中糖皮质激素受体亚型GRα降低可导致激素抵抗，因此调控其表达可能成为改善激素疗效的干预手段。本研究首先利用基因测序分析嘌呤霉素诱导的小鼠足细胞损伤和修复的microRNA表达差异，筛选出miR-30a-5p、miR-30d-5p、miR-10a-5p等11个miRNA的表达变化显著。分别在足细胞正常分化和损伤修复条件下，发现miR-30a与GRα mRNA的表达均呈反向，与GRβ mRNA的表达均呈同向。转染miR-30a Mimics和Inhibitor至上述状态的足细胞，分别导致GRα mRNA水平降低和升高，而GRβ mRNA水平无变化。转染miR-30a Mimics至嘌呤霉素和地塞米松预处理的足细胞中，GRα mRNA和蛋白水平均降低，且对蛋白水平的影响较明显。同时，足细胞凋亡比例升高，足细胞增殖活力降低。而转染miR-30a Inhibitor，上述指标均均出现相反地变化。转染miR-30a Mimics和GRα siRNA，GRα蛋白水平均降低，且二者间无差异。双荧光素酶报告系统检测结果显示，miR-30a与融合GRα mRNA全长序列的双荧光素酶报告质粒共转染，荧光素酶活性无明显降低。miR-30a选择性调控小鼠足细胞中GRα的表达；尽管miR-30a不是通过常规机制调控GRα，但抑制miR-30a可以通过上调GRα减少足细胞凋亡。为了进一步验证二者的关系，本研究进行了初步的小样本临床研究，探讨miR-30a-GRα及其下游细胞因子与激素疗效的相关性，筛选出外周血单个核细胞GRα/β和血清IL-8作为评价激素抵抗的生物标志物。本研究首次应用基因测序建立小鼠足细胞cDNA文库，分别对小鼠足细胞损伤和修复不同状态下miRNA的表达变化，进行了深入研究。并利用内源性靶基因miR-30a为干预靶点，深入研究其对GR亚型的选择性调控作用及机制，其结果可能成为干预激素敏感性的潜在靶点。