凝血酶受体家族在血管损伤后重塑中的作用以及和局部炎症的关系

The pathophysiological process of stenosis and remodeling after angioplasty is related to coagulation and inflammatory system. More and more studies have indicated that adventitial inflammation is an initial factor for remodeling after damage of artery intimal. .The objective of this study is to investigate the expression, proliferation and apoptosis effect of proteinase-activated receptor1,2,3,4(PARs) in vascular smooth muscle cell and adventitial fibroblast cell, observe the relationship between PARs and inflammatory factors in artery media and adventitial. Furthermore, by the usage of the antagonist and agonist of PARs, explore the relationship among PARs, inflammatory factors, systolic and diastolic and remolding of artery after damage, to discuss if we can provide a new therapy target to prevent stenosis and remolding after angioplasty.

凝血系统和炎症反应均参与了血管损伤后的狭窄和血管重塑的病理生理过程。越来越多的研究表明血管内膜损伤后的血管外膜炎症反应乃为血管损伤过程的始发因素。.本课题拟通过研究凝血酶受体家族(PARs)-蛋白酶可活化的受体-1,2,3,4 在血管外膜成纤维细胞和血管中膜平滑肌细胞中与细胞增殖和凋亡和炎症因子的表达和分泌的关系。进一步观察采用凝血酶受体抑制剂或拮抗剂处理后，血管损伤后局部炎症因子的改变和血管收缩舒张功能的变化。探讨PARs受体家族与血管损伤和局部炎症的关系，为抗血管狭窄新药开发治疗血管性疾病提供理论依据。

背景：蛋白酶活化受体（Protease-activated receptor, PAR）1和2在纤维发生和炎症性疾病中都有重要作用。血管紧张素II通过激活血管外膜成纤维细胞（adventitial fibroblasts, AFs）参与血管外膜重塑。本研究为了探讨PAR1和PAR2是否参与血管紧张素II引起的外膜重塑过程，为治疗血管重塑性疾病提供新的作用靶点。.方法和内容：选取6-8周SD大鼠，用组织贴块法培养原代AFs。分别用PAR1激动剂（PAR1-AP, TFLLR-NH2）和PAR2激动剂（PAR2-AP, 2-furoyl-LIGRLO-NH2）刺激AFs，用CCK8方法（cell counting kit-8 assay）检测细胞增殖，用划痕实验（wound scratch assay）检测细胞迁移，用蛋白免疫印迹实验（Western blot）检测细胞表型转化的标志蛋白（α-smooth muscle actin, α-SMA），纤维化蛋白如胶原I（collagen I）、纤维粘连蛋白（fibronectin），以及转化生长因子β（transforming growth factor β, TGF-β）的表达，用实时定量聚合酶链式反应（real-time PCR）检测炎症因子白介素-6（interleukin-6, IL-6）和单核细胞趋化蛋白-1（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）的转录水平。用PAR1抑制剂（SCH79797）和PAR2抑制剂（ENMD-1068）提前处理细胞，再用血管紧张素II（angiotensin II, AngII）处理细胞，用上述方法检测细胞的增殖、迁移、纤维化蛋白的表达、炎症因子的表达是否有变化。用AngII刺激AFs，用Western blot检测细胞PAR1和PAR2的表达是否增加，并用免疫荧光检测PAR1和PAR2的内吞，再用AT1受体抑制剂氯沙坦和AT2受体抑制剂PD123319处理细胞，观察PAR1和PAR2的表达、内吞有无变化。用免疫荧光检测正常组和AngII灌注组大鼠血管外膜PAR1和PAR2表达有无变化以及和α-SMA、MCP-1是否有共表达。.结果：PAR1和PAR2激活可以促进AFs增殖、迁移，纤维化蛋白collagen I、fibronectin表达