内源性硫化氢对胃运动的调节作用及其机制研究

硫化氢是新发现的气体信号分子，由CSE或CBS催化半胱氨酸生成，参与对机体生理和病理生理功能的调节。硫化氢也参与了消化道运动的调节，但其生理意义和机制不清。我们的预实验表明内源性硫化氢主要通过兴奋肠神经丛（ENS）内感觉（AH）神经元实现对胃运动的抑制。为验证该假设，我们将用野生和CBS、CSE基因缺陷小鼠研究（1）硫化氢是否为消化道的内源性物质。将定位消化道上表达CBS和CSE的细胞，检测胃纵行肌肌间神经丛标本(LMMP)自发和诱发释放硫化氢的情况及硫化氢释放是否依赖酶途径。（2）整体及离体实验研究内源性硫化氢对消化道运动的调节及其生理意义。(3)膜片钳原位记录ENS内神经元活动技术研究硫化氢对AH神经元电活动的影响，探讨PKC-gamma的激活在其中的作用。该研究将首次揭示内源性硫化氢调节胃运动的分子机制和生理意义，为进一步探讨功能性消化不良等疾病发生机理和开发新的治疗方法提供依据。

完成以下两部分研究成果：.1. 皮下注射L-Cysteine引起大鼠血压下降，胃内压力下降；L-Cysteine抑制离体胃体纵行肌条的自发收缩，该作用可以被TTX阻断，但不受ATP依赖钾通道阻断剂Gli和L-NAME的影响。CBS和CSE的阻断剂PAG和AOAA能引起胃离体肌条张力增高，并拮抗由L-Cysteine引起的胃肌条运动抑制；CBS和CSE均表达与胃肌间神经丛。该部分实验证实，胃肌间神经丛内的CBS和CSE 能催化L-Cysteine产生内源性H2S，对胃运动产生紧张性抑制作用。.2. NaSH 对大鼠十二指肠纵行肌条的自发收缩活动产生先兴奋后抑制的双相作用，其中兴奋作用产生快而短暂，而抑制作用持续时间较长。阻断TRPV1通道或者NK1受体抑制兴奋作用，而阻断ATP依赖钾通道逆转抑制作用，抑制蛋白巯基硫氢化对这两种作用均有抑制作用，而TTX队长这另种作用均无作用。NaSH 引起分离培养的胃平滑肌细胞舒张，该作用与ATP依赖钾通道和蛋白巯基硫氢化有关。免疫荧光技术表明CBS和CSE存在于十二指肠肌间神经丛的神经元，但不存在于平滑肌细胞。NaSH 引起十二指肠肌间神经丛超极化，外向离子流增加。该作用是有ATP依赖的钾通道开放引起的，与巯基硫氢化有关。