卵巢局部调控因子BDNF在慢性应激干扰卵泡发育中的作用研究

慢性应激可致卵泡发育障碍，引起多种女性生殖内分泌疾病，严重影响妇女心身健康。卵泡发育受垂体促性腺激素和卵巢局部调控因子共同调控，已知慢性应激可通过抑制促性腺激素分泌影响卵泡发育，但缺乏对卵巢局部调控因子的研究。综合文献报道和申请者省基金资助的前期研究基础，我们提出慢性应激可通过下调卵巢局部脑源性神经营养因子（BDNF）影响卵泡细胞存活和颗粒细胞增殖，从而干扰卵泡的发育和功能。为验证这一假说，我们将比较观察慢性应激加促性腺激素组和单用促性腺激素对照组在卵泡形态学、排卵数和卵母细胞发育潜能上的差异；同时观察卵泡局部BDNF表达与卵泡细胞凋亡、增殖的情况，分析其相关性；并通过工具药处理的方法验证BDNF在其中的作用。研究将阐明局部调控因子BDNF在慢性应激干扰卵泡发育过程中的作用及途径，可望为治疗慢性应激相关的卵泡发育不良提供理论依据，丰富对慢性应激相关的女性生殖内分泌疾病的认识。

该项目按照计划顺利进行和完成，项目共发表SCI论文4篇，中文期刊5篇。培养硕士3名。并作出了以下研究成果：.1、本课题首先建立和验证了慢性不可预见温和应激小鼠应激模型。运用旷场实验验证小鼠存在应激行为学表现，应用免疫组化方法发现下丘脑室旁核CRH阳性神经元数目明显增加，ELISA方法检测发现外周血浆皮质酮水平明显上升。以上结果提示小鼠应激模型成功建立。.2、免疫组化和免疫印迹方法均显示慢性应激后BDNF水平明显下降，免疫组化定位结果显示以在窦卵泡中水平下降为主,而在原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡中水平变化不明显。.3、HE结果显示，慢性应激可减少正常次级卵泡和正常窦卵泡数目，增加闭锁次级卵泡和闭锁窦卵泡数目，给予补充BDNF后，正常次级卵泡数目无明显改变，正常窦卵泡数目有明显增加，补充BDNF后，闭锁次级卵泡数目未见明显减少，但闭锁窦卵泡数目明显减少。.4、促排卵和卵母细胞孤雌激活后囊胚培养结果显示，慢性应激可抑制促性腺激素促排卵后的排卵数和孤雌激活后的囊胚形成率，对卵母细胞成熟率和孤雌激活后的卵裂率无明显影响。补充BDNF可增加排卵数，使卵母细胞孤雌激活后的囊胚形成率明显上升。.5、BrdU掺入法结合免疫组化方法显示，慢性应激能抑制次级卵泡和窦卵泡内颗粒细胞的增殖，补充BDNF后，对次级卵泡内颗粒细胞增殖无明显影响，但可使窦卵泡内颗粒细胞增殖恢复正常。.以上结果提示慢性应激可通过BDNF干扰卵泡发育、抑制促排后排卵数、抑制卵母细胞发育潜能、抑制卵泡颗粒细胞增殖。