Bruton酪氨酸蛋白激酶在脓毒症急性肺损伤中的作用和机制研究

非特异性免疫功能亢进是脓毒症免疫功能紊乱的主要表现，LPS/TLR4信号系统过度活化是脓毒症免疫紊乱的重要机制，胞浆内非受体型Bruton酪氨酸蛋白激酶（BTK）是TLR4信号通路的关键信号分子，由于其主要表达于髓系细胞，影响非特异性免疫，成为脓毒症研究的热点。我们利用TLR4基因突变鼠，证实TLR4信号通路参与急性肺损伤，并且TLR4的内源性配体硫酸类肝素及外源性配体LPS与TLR4先后激活，以"二次打击"形式促进脓毒症进展，以上过程都伴有BTK的表达改变，该研究发表于最新的J Surg Rearch。为证实以BTK为靶点选择性调控脓毒症可行性，本课题以基因转染及RNA干扰手段，增强或阻断巨噬细胞及肺组织BTK功能，观察TLR4下游信号通路蛋白NF-κB、AP-1、MAPK、炎性细胞因子和细胞凋亡改变，探讨BTK参与脓毒症急性肺损伤的分子机理，为临床防治脓毒症和脏器损伤提供新思路。

脓毒症是感染所致的临床常见急危重症之一,因来势凶猛、进展迅速、病死率高,得到了医学界广泛的关注。脓毒症与急性肺损伤/急性呼吸窘迫综合征（ALI/ARDS）联系密切,脓毒症所致的多器官功能不全中,肺是最早发生衰竭的器官，是脓毒症患者死亡的主要原因。LPS/TLR4信号系统过度活化是脓毒症的一个重要发病机制。Bruton酪氨酸蛋白激酶（BTK）是近年来发现的与免疫和炎症反应密切相关的胞浆内非受体型酪氨酸激酶信号分子，它在LPS/TLR4信号转导中的作用是当前研究的热点。BTK信号通路与炎症关系的研究尚局限于体外观察，它在体内炎症反应中的调控作用仍不清楚。本课题结合体内和体外实验，深入研究BTK在脓毒症时肺局部炎症反应和肺损伤发生发展中的作用及分子机理。本课题通过体外构建稳定的BTK的siRNA质粒载体pLKO-BTk-NC，经慢病毒包装和体外转染实验证实其阻断BTK磷酸化基因活化的有效性，为今后应用RNA干扰技术研究BTK通路相关病理生理机制提供一有效干预手段；进一步通过体内实验证实，抑制BTK通路活化，能够显著减轻脓毒症小鼠机体炎症反应程度，从而减轻由此诱导的急性肺损伤程度，为临床防治该病症提供了新的理论依据和未来治疗的新靶点；且应用RNA干扰技术阻断离体小鼠肺巨噬细胞BTK通路的活化，能够显著抑制肺巨噬细胞在LPS刺激后的炎性介质释放能力，同时也造成其他炎症相关信号通路活化的延迟，提示抑制BTK信号通路活化来阻止肺部炎症反应具有更直接确切的治疗作用。我们的研究为进一步揭示BTK在脓毒症和多器官损伤中的作用打下基础，为临床防治脓毒症及MODS提供新的思路和理论依据。上述结果已总结形成SCI论文两篇，分别于2013年发表于Eur Rev Med Pharmacol Sci、2014年发表于Cell Biochem Biophys。本课题开展期间培养研究生4名。