子宫内膜间质细胞来源的miR-195通过调控FKN介导NK细胞分化发育和异位灶形成的分子机制

The interaction of endometrial stromal cell(ESC) and immunocompetent cells is the important part of ectopic foci formation and immune escape,but the exact mechanism is not clear. Our research group have found for the first time that miR-195 inhibits proliferation and growth of ESC by targeting Fractalkine(FKN); meanwhile ESC induces immunotoleranced polarization of MΦ through secreting FKN spontaneously. Recently we discovered that the severity of endometriosis positively correlate with the number of NK cells in the peritoneal fluid; and NK cell expressing the FKN receptor CX3CR1, raised by FKN. Therefore we hypothesize that ESC derived miR-195 regulating FKN is involved in the raising and regulating the function of NK cell.We will establish the ESC-MΦ-NK and ESC-NK direct /indirect co-culture system to analyze the molecular mechanism of miR-195 regulating NK cell differentiaion further by MΦ; and then analyze the function and mechanism of miR-195 regulating NK cell differentiation directly; and subsequently analyze the regulatory effect of these educated NK cells on the biological function of ESC;and finally verified by animal experiment.This study will deepen the understanding that inflammatory microenvironment influence ectopic endometrium migration and planting; ultimately provide new targets and scientific basis for endometriosis's prevention and treatment.

内膜间质细胞（ESC）与免疫活性细胞的相互作用是异位灶形成和免疫逃逸的重要部分,但其中的确切机制不明确。本课题组首次发现：miR-195通过调控FKN抑制ESC的增殖和生长；同时ESC通过分泌FKN促进巨噬细胞（MΦ）向M2型极化。我们新近发现，内异症严重程度与腹腔液中NK细胞数量呈正相关；且NK细胞表达FKN的受体CX3CR1,受FKN募集。因此我们推测ESC来源的miR-195调控FKN参与募集并调节NK细胞的功能。课题拟建立ESC-MΦ-NK与ESC-NK细胞的直接/间接共培养体系，分析miR-195通过MΦ进一步调节异位灶NK细胞分化发育的分子机制；再分析miR-195直接调节NK细胞分化发育的作用与机制;随后分析这种被训导的NK细胞对ESC生物学功能的调节作用；最后动物实验加以验证。本课题将深化炎症微环境影响异位内膜迁移和种植的认识；最终为内异症的防治提供新的靶点和科学依据。

子宫内膜异位症（内异症）是妇科常见疾病，其子宫内膜异位于宫腔之外，常因反复周期性出血而引发持续加重的盆腔粘连、疼痛和不孕等症状。内异症在生育期妇女中的发病率约6-10%，由于该病病因未明，尚无根治性手段，不仅严重影响患者身心健康和生活质量，给家庭也带来巨大的精神压力和经济负担。我们课题组首次发现miR-195通过调控Fractalkine(FKN)抑制人内异症患者的在位子宫内膜间质细胞（endometrial stromal cell,ESC）增殖和生长，促进细胞凋亡。我们最近研究首次证实内异症患者的在位ESC通过分泌FKN诱导巨噬细胞向免疫耐受型极化，训导后的巨噬细胞通过p38MAPK/integrinβ1信号通路促进ESC的侵袭能力。我们还发现，内异症严重程度与腹腔液中NK细胞数量呈正相关。而且文献报道NK细胞表达FKN的受体CX3CR1,受FKN募集。本课题以异位灶微环境为中心环节，以miR-195对FKN调控为切入点，拟研究miR-195通过调节内异症患者的NK细胞与ESC和巨噬细胞之间的分子对话，从而促进子宫内膜异位灶的形成，导致其免疫逃逸的作用机制。我们发现：1）ESC 与 NK 细胞共培养后，CD56+CD16-NK 细胞比例显著增加，加入FKN抗体可以逆转这一反应。同时 CD56+CD16-NK 细胞表面耐受性分子 KIR2DL1、KIR3DL1 表达水平上调，而表面分子 NKp30, NKp44 和胞内细胞因子 IFN-γ、Perforin 和 Granzyme B 表达水平下降。2）为了进一步解析 ESC 通过分泌FKN对 NK 分化的调节机制，我们首先应用蛋白芯片筛选不同FKN水平 ESC（Ctrl 组和 MiR-195降调处理组）差异性表达的可溶性细胞因子和表面分子，通过 KEGG 数据库中的基因之间、基因产物之间的作用关系，筛选差异蛋白 中与 NK 相关分子 CD16、KIR2DL1、KIR3DL1、NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D、IFN-γ、 Perforin 和 Granzyme B 等存在关联的蛋白，我们发现与 NK 相关分子存在关联的差异性蛋白包括细胞裂解液和细胞上清中的CD82。3）这种经训导的NK细胞促进人ESC的侵袭、增殖，抑制其凋亡。这些工作拓展了我们对异位灶微环境中免疫逃逸的理解。