靶向AEG-1的miR-193a与小分子抑制剂sorafenib对肝细胞癌的作用及机制研究

Rare studies have been reported of miR-193a on the biological function of hepatocellular carcinoma (HCC). AEG-1 was found to have the potential to be a target gene of miR-193a via several predicting software. Furthermore, we found previously that the expression of AEG-1 was significantly higher in HCC tissues compared to the noncancerous hepatic tissues. On the contrary, miR-193a was down-regulated. Thus we hypothesize that miR-193a may play a vital role in the hepatocarcinogenesis and development of HCC by targeting AEG-1. To verify this, we plan to perform real time RT-qPCR, in situ hybridization, cell transfection, RNA interference, western blot, invasion and metastasis experiments and animal models in the current study. The aims of the study include: to investigate the expression and clinical significance of miR-193a in HCC tissues; to study the effect, mechanism and the target gene of miR-193a on the biological function of HCC cells and to explore the synergistic effect of miR-193a and sorafenib combination on the related signal pathway. The current study focuses on the new viewpoint of miR-193a and will help to reveal the metastatic mechanism of HCC, and provide new molecular target for prevention and new therapy of HCC.

miR-193a在肝细胞癌（HCC）中的研究鲜见报道。前期我们通过多个miRNA预测软件发现AEG-1可能是miR-193a的潜在靶基因，因此我们检测AEG-1在HCC中的表达，结果发现AEG-1在HCC中的表达明显升高，同时小样本的预实验发现miR-193a的表达降低。据此提出假说：miR-193a通过靶向癌基因AEG-1而在HCC的发生和发展中发挥作用。为验证此假说，我们采用real time RT-qPCR、原位杂交、细胞转染、RNA干扰、western blot、侵袭转移实验及动物模型等手段，从分子、细胞、组织及动物水平探讨miR-193a表达的临床意义；明确miR-193a对HCC生物学功能的重要作用机制及其靶基因；探索miR-193a联合小分子抑制药物sorafenib对HCC治疗及相关信号通路的协同作用。本研究以miR-193a这个新视点为揭示HCC的发生和发展机制奠定基础。

MiR-193a等多个非编码RNA在肝细胞癌（HCC）中的研究未见报道，前期我们推测在HCC中miR-193a可能通过靶向AEG-1基因发挥它的作用。本研究通过PCR和免疫组化方法检测miR-193a-3p和AEG-1在HCC中的表达，结果发现在HCC中miR-193a-3p表达降低，AEG-1的表达明显升高，但是两者的表达未见明显负相关。体外增殖和凋亡等系列实验进一步证明了miR-193a-3p能够抑制HCC细胞的增殖和促进凋亡，发挥抑癌作用，而AEG-1起促癌作用。进一步通过计算生物学、共表达和双荧光素酶实验等方法对miR-193a-3p和AEG-1的靶向作用研究发现：两者不存在直接的靶向关系，而miR-193a-3p通过靶向CyclinD1(CCND1)等多个靶基因发挥作用，AEG-1则作为miR-30a-5p的靶基因之一。研究过程中发现Salvi等的研究已经证明“联合使用miR-193a和索拉非尼能够协同抑制体外HCC细胞的增殖”。综上，系列研究表明：miR-193a-3p和AEG-1有望成为HCC诊疗的有效指标。.在完成以上研究的基础上，课题组对非编码RNA的一些研究热点进行了拓展：（1）氯化两面针碱在HCC中可能通过靶向调节hsa_circ_0088364和hsa_circ_0090049等环状RNA（circRNA）、或靶向调控肿瘤相关基因“拓扑异构酶1”和“拓扑异构酶2A”等的表达而发挥抗HCC作用，该研究为氯化两面针碱在HCC治疗中的应用奠定理论基础；（2）通过circRNA-miRNA-mRNA和lncRNA-miRNA-mRNA的网络分析，研究circRNAs和lncRNAs在HCC中的作用及潜在分子机制，例如：lncRNA PVT1和lncRNA NEAT1在HCC中通过靶向调控多个相关信号通路和靶基因而发挥促癌作用。.该研究完成了既定的考核指标。发表论文11篇，其中SCI收录论文10篇；培养博士研究生2人、硕士研究生2人，培养青年研究骨干2人。