原发性胆汁性肝硬化中肝纤维化相关的microRNA筛选及功能初步研究

Primary biliary cirrhosis（PBC） is an organ-specific autoimmune liver disease with unclear pathogenesis ，will lead to liver fibrosis and cirrhosis finally. Study of pathogenesis will help to improve the level of clinical diagnosis and treatment. MicroRNAs (miRNA) are small, single-stranded noncoding RNAs,which participate in many vital processes, including cell proliferation, cell differentiation and apoptosis.MiRNAs have different expression in different stages and different organs.This stdy is aimed to explore the role of microRNA in the mechanisms of hepatic fibrosis in PBC patients.We hope our study will reveal a significant different expression of microRNAs in different stage of liver fibrosis and look for a new method for the treatment of PBC in this study.

原发性胆汁性肝硬化（Primary biliary cirrhosis，PBC）是一种以肝脏为主要靶器官的自身免疫性疾病，治疗药物单一，最终导致纤维化及肝硬化。PBC病因及发病机制仍不清楚。微小RNA（microRNA，miRNA）参与多种生物调节途径，是近几年基础研究转化至临床研究的典范，miRNA的表达在生长发育的不同阶段和不同的组织中均不同。目前国内外关于microRNA在PBC肝纤维化过程中作用的报道还很少。 因此，本研究目的旨在研究microRNA在PBC患者肝纤维化过程中的表达差异，并结合其临床情况及前期外周血的miRNA研究，以明确PBC患者肝纤维化发病机制中microRNA的作用及重要性，也为从新的视角探索PBC的发病机制，寻找治疗PBC的新方法

本研究是探索微小RNA在原发性胆汁性胆管炎（曾名原发性胆汁性肝硬化）的外周血和组织中的表达差异和初步功能研究，明确其在肝纤维化进程中的作用，寻找治疗可能的新方法。. 主要内容是首先采用高通量miRNA芯片技术筛选患者及健康对照者外周血及肝组织中差异性表达的miRNA，进行信号通路分析，并且在大样本PBC患者的不同免疫细胞和肝组织中行实时定量PCR验证。同时通过靶基因预测、生物信息学分析等，了解差异miRNA靶基因可能参与的信号通路。对PBC患者外周血PBMC及CD4+T细胞中高表达的miR-150-5p的靶基因进行验证，同时结合临床分期进行miRNA表达分析。. 研究共筛选出肝组织中12个高表达的miRNA，5个低表达miRNA，经过KEGG分析，差异miRNA主要与MAPK、T细胞及B细胞受体信号通路、mTOR信号通路、Jak-STAT信号通路等相关。PBC患者外周血单个核细胞中miR-150-5p及miR155-5p均有表达差异。而分选CD4+T细胞及CD19+B细胞进行miRNA验证后，miR-150-5p在CD4+T细胞中有表达差异。肝组织中miRNA-21表达有显著统计学差异。对多种候选靶基因进行验证，进一步明确AKT3为miR-150-5p的靶基因之一。而不同临床分期的PBC患者组织与外周血miRNA表达并没有显著差异。miRNA可能通过PI3K-mTOR、MAPK等多种信号通路参与疾病发生及进展，可能成为疾病研究及治疗的新靶点。本研究为miRNA在PBC发病机制中的作用带来新的策略和方法。.