核苷类似物干预下HBV准种全长序列变异模式及其选择特性研究

病毒变异形成准种(quasispecies)，是病毒进化的基础。大范围核苷类似物治疗打破了HBV的自然选择平衡，必然对乙型肝炎流行规律产生深远影响。目前迫切需要认识HBV耐药准种在人群中的选择特性（针对预防接种疫苗的逃逸、克服传播瓶颈的优势度、变异表位的免疫识别）。本项目在近年对HBV准种的前期研究基础上，以拉米夫定干预为模型，展开（1）全长基因组TA克隆、测序、种系进化分析；（2）变异相关生物学特性改变的功能验证以及变异表位的免疫信息学预测；（3）不同变异模式准种克服垂直传播、水平传播、肝移植再感染等传播瓶颈的偏向性观察；（4）以HBV DNA载量快速上升窗口期病毒突破性肝炎为模型，鉴定突破性乙型肝炎窗口期引发免疫识别的表位及其性质（溶胞性、病理性、优势、亚优势、隐匿性）。本研究旨在认识HBV准种的全长序列变异模式及选择特性，为乙型肝炎传播的特异性阻断及新型有效疫苗的设计提供新策略。

为了认识HBV准种的全长序列变异模式及选择特性，了解HBV不同变异模式准种的HLA 限制性、传播优势度、突破性肝炎窗口期免疫选择等基础问题，并为乙型肝炎传播的特异性阻断、新型有效疫苗的设计以及临床抗病毒治疗提供新策略。我们按照项目计划书进行了相关研究，其研究成果有：①核苷类似物干预下乙肝HBV准种的全基因组序列的变异模式研究，发现核苷类似物治疗与否、不同药物、同一患者不同区域变化有不同模式；②HBV前C区及BCP区变异对长期拉米夫定治疗的耐药性发生的影响不同，PC区1896位点变异组比野生组更容易发生耐药，而BCP区1762/1764双位点变异组与野生组之间无明显差异；③妊娠后期应用替比夫定具有良好的安全性，可显著降低妊娠晚期孕妇血清HBV DNA水平，同时替比夫定与仅主被动免疫联合相比能进一步降低HBV母婴传播的风险；④阿德福韦酯耐药变异株在发生对阿德福韦酯耐药时也发生了HLA0201 CTL表位的变异；⑤建立TAP转运钛预测方法以及表位肽亲和力预测方案。.总之，拉米夫定耐药对乙肝表面抗原和核心区基因的影响，以及HLA0201限制的患者阿德福韦酯耐药导致CTL表位的变化对于今后耐药患者的诊断和进一步免疫机制探讨提出新的问题。其研究成果在国内外已被推广，所建立的表位预测方法等研究已被多家实验室应用，且妊娠后期应用替比夫定等研究成果也写入了亚太乙肝指南。