抑制树突状细胞负性调节因子A20对HCV特异性T细胞免疫应答的作用及其机制

HCV感染的不同结局是病毒与机体免疫系统相互作用的结果,病毒有效清除依赖于正确免疫应答发挥。HCV持续感染与T细胞的耗竭/失能有关,其中DC在诱导T细胞免疫应答中发挥中心作用.研究证明，负性调节因子/受体的抑制作用是T细胞耗竭和DC成熟诱导失能的分子基础。A20是新近被证明的一种信号反馈抑制因子,可通过TNFR、RIG-1及TLR信号通路广泛调控DC成熟、细胞因子产生及免疫刺激潜能。基于我们前期对HCV多表位DC疫苗的创新性研究基础,依赖已建立的HCV多表位DC诱导T细胞应答检测技术,提出本课题研究思路:拟选择HCV持续感染者外周血DC,分析A20的表达;制备siRNA腺病毒载体,沉默A20基因在人源DC和小鼠DC中的表达;在人体外及小鼠体内多水平上观察A20沉默的DC对HCV特异性体液免疫及T细胞免疫的影响,阐明分子机制,为HCV-DC疫苗临床应用奠定基础

A20最早发现于TNF-α刺激后的人脐静脉内皮细胞中，被鉴定为TNF-α诱导的初始反应基因。A20可由TNF-α，IL-1，LPS以及其他不同种类的刺激物诱导表达，被认为是NF-κB的负反馈抑制因子。课题组研究发现，分离自健康人mDC细胞在静息状态下亦组成性表达A20，且在poly-IC体外刺激mDC过程中，A20的表达水平明显下调，从而促使DC活化成熟。根据文献报道和本实验的研究结果，推测在静息状态下免疫细胞中DC等细胞需要A20维持在一定水平以控制异常的免疫反应并维持免疫稳态。当外源或内源刺激物持续性存在并达到一定强度后，A20表达的下调解可解除抑制因素促进免疫细胞活化。. HCV慢性感染者中的mDC在成熟、细胞因子分泌及免疫刺激能力方面都存在缺陷。课题组应用poly-IC体外刺激mDC活化，观察A20变化对mDC功能的影响。结果发现，上调mDC中A20的表达引起共刺激分子HLA-DR，CD86以及趋化因子受体CCR7的表达受到抑制。同时，细胞培养上清中IL-12水平也相对降低，IL-10水平显著升高。显示A20的表达异常可能是HCV慢性感染过程中mDC失能的又一重要分子机制。在IFN-α治疗过程中，应用IFN-α刺激不仅可以下调HCV慢性感染者mDC中A20的表达水平，亦可增强mDC表面HLA-DR，CD86和CCR7表达。IFN-α刺激A20表达与HLA-DR，CD86和CCR7负相关，提示IFN-α可能通过控制A20的表达水平发挥调节mDC功能的作用。课题组应用A20-siRNA对HCV患者的mDC进行干扰，随后检测干扰后mDC的表型和功能。结果显示，干扰后mDC分泌IL-12和刺激T细胞增殖以及刺激T细胞分泌IFN-γ增多。. 负性调节因子/受体在慢性病毒持续感染稳态建立过程中发挥着重要作用。病毒感染机体后，特异性CD4+和CD8+ T细胞受到固有免疫正性和负性两种调节因子的精细调控，A20等在维持平衡中发挥作用。病毒通过诱导A20等负调控因子表达，从而抑制NF-kb信号通路活性，最终影响固有免疫细胞炎症反应和正常抗原提呈功能的发挥。