浸润的树突状细胞和巨噬细胞表型和功能转化——尖锐湿疣免疫逃逸的新机制

人乳头瘤病毒(HPV)感染的免疫逃逸是尖锐湿疣(CA)患者治疗后复发的根本原因。迄今为止，其逃逸的机制仍不清楚。我们前期研究证实调节性T细胞（Treg）在CA疣体内聚集而介导免疫抑制；同时在疣体内还伴有众多的树突状细胞（DC）和巨噬细胞（Mφ）。尽管DC和Mφ在清除病原体过程中发挥正向免疫应答作用，但文献提示Treg可塑造它们成为具有免疫抑制功能的亚细胞类群。基于此，在本项目中我们提出假设：受尖锐湿疣局部微环境的影响，DC和Mφ从正常抗病毒状态转化为具有免疫抑制作用的细胞类群，从而促进HPV感染的免疫逃逸；Treg可以诱导DC和Mφ向免疫抑制方向发展。本课题以DC和Mφ为重点，对CA微环境中DC和Mφ分布、免疫表型、功能演变等过程展开深入研究，并探讨它们与Treg的相互影响，从新的角度阐述CA免疫抑制的机制，有望为防治CA的复发提供新的临床治疗策略。

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）免疫逃逸新途径：微颗粒介导的HPV感染巨噬细胞。方法：1. 从尖锐湿疣组织（CA）中提取的微颗粒和从健康人外周血中分离的巨噬细胞共培养，收集培养后的巨噬细胞并提取上清液中的微颗粒，上清液中提取的微颗粒再与新分离的巨噬细胞共培养，如此进行四次共培养，通过RT-PCR的方法检测每次共培养的巨噬细胞基因组中是否存在HPV-DNA；2.免疫细胞化学方法观察：与微颗粒共培养的巨噬细胞是否被染成棕黄色；3.电镜观察：与微颗粒共培养后的巨噬细胞其核内是否含有HPV病毒颗粒；4.双光子荧光显微镜观察：与微颗粒共培养后，巨噬细胞可否吞噬尖锐湿疣组织来源的微颗粒及微颗粒中是否含有HPV病毒颗粒，巨噬细胞吞噬微颗粒后是否与溶酶体结合。结果：1. RT-PCR方法检测结果：每次（共四次）巨噬细胞与微颗粒共培养后，其基因组中HPV6/11-DNA表达均为阳性。2. 免疫细胞化学方法观察：与微颗粒共培养的巨噬细胞中HPV染色呈棕黄色阳性反应。3. 电子显微镜观察：与微颗粒共培养的巨噬细胞其核中存在HPV病毒颗粒。4. 双光子荧光显微镜观察：经荧光染色后，绿色的巨噬细胞中含有红色的微颗粒，红色的微颗粒中则含有绿色荧光染色的HPV；巨噬细胞中红色溶酶体与绿色微颗粒未见结合。结论：1. HPV可通过微颗粒的方式感染巨噬细胞。2.巨噬细胞感染HPV后还能产生并释放新的含HPV的微颗粒。