酪氨酸磷酸酶 Shp2 在神经突触发育过程中的信号传导机制研究

在神经肌肉接头发育过程中，突触后膜乙酰胆碱受体（AchR）簇的形成至关重要，此过程主要是由神经末梢分泌的聚集蛋白(agrin)磷酸化其受体肌肉特异激酶（MuSK），并进一步磷酸化其下游蛋白而介导的，最终引起AChR磷酸化并成簇。相反，与酪氨酸激酶相对抗、相平衡的酪氨酸磷酸酶所调控的去磷酸过程机制不甚明确。结合已有文献以及我们的前期工作揭示了应用酪氨酸磷酸酶抑制剂可增加MuSK磷酸化水平及AChR聚集，研究还显示酪氨酸磷酸酶Shp2影响MuSK活性水平以及AChR聚集。那么寻找MuSK下游被磷酸化的蛋白、并能与Shp2的SH2区域结合，即Shp2的底物是进一步的研究方向。在本项目中，我们将应用细胞系、原代培养、动物模型等手段，从细胞、分子生物学、功能等方面进一步阐明MuSK、Shp-2、SIRPα1、AChR以及其它候选蛋白之间的信号传导机制，为进一步揭示神经突触发育分子机制提供新的思路。

在神经肌肉接头发育过程中，突触后膜乙酰胆碱受体（AchR）簇的形成至关重要，此过程主要是由神经末梢分泌的聚集蛋白(agrin)磷酸化其受体MuSK并进一步磷酸化下游蛋白而介导的，最终引起AChR磷酸化并连接成簇。相反，在这一过程中同样起重要作用，与酪氨酸激酶相对抗、相平衡的酪氨酸磷酸酶所调控的去磷酸过程机制不甚明确。课题揭示了应用酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸盐可以增加MuSK磷酸化水平及AChR聚集，研究还显示此家族的Shp2影响MuSK活性水平以及AChR的聚集，可以介导AChR的重新分布。本课题就MuSK、Shp-2、SIRPα1以及AChR几者之间具体信号的传导机制进行深入研究，以揭示的神经突触发育过程中的分子机制。应用免疫共沉淀、融合蛋白pull-down证明了了Shp2与SIRPa1之间的作用，同时实验表明在agrin刺激MuSK后，SIRPa1的磷酸化、与Shp2的信号传导可以通过src影响SIRPa1的磷酸化水平；实验提供了Src与shp2/SIRPa1相互作用的证据。