Hsa_circ_0008602通过miR-148a-3p调控PTEN在非小细胞肺癌增殖与凋亡中的作用及机制研究

Non-small cell lung cancer is a malignant tumor with high mortality and poor prognosis , which is a serious threat to human health. Recent studies have shown that circRNAs had large capabilities in development and progression of cancers. However, the mechanisms underlying circRNAs remain largely unknown so far. We found that hsa_circ_0008602 expression was significantly downregulated in NSCLC tissues while miR-148a-3p was upregulated. Furthermore, the PTEN is predicted to be the direct target of miR-148a-3p by bioinformatics methods. PI3K/Akt signaling pathway mediated PTEN phosphorylation was associated with cell proliferation and apoptosis. Therefore, we speculate that hsa_circ_0008602 may promote the apoptosis and inhibit the proliferation of NSCLC through miR-148a-3p and PTEN/PI3K/Akt signaling pathway. The objective of this project is to clarify the role and the mechanism of hsa_circ_0008602 in NSCLC through miR-148a-3p, and provide important theoretical basis in researching the new target drugs for NSCLC.

非小细胞肺癌（NSCLC）死亡率极高、预后差，严重威胁人类健康。环状RNA在肿瘤发生发展中起重要作用，然而环状RNA在NSCLC发生发展中的作用和机制仍不清楚。前期我们研究发现NSCLC组织中环状RNA分子hsa_circ_0008602表达显著低于癌旁组织，生物信息学预测miR-148a-3p与hsa_circ_0008602有结合位点，且二者在NSCLC组织中表达呈负相关；进一步研究发现miR-148a-3p能负性调节PTEN表达，而PTEN是增殖凋亡相关信号通路PI3K/Akt的重要信号分子。因此推测hsa_circ_0008602可能通过miR-148a-3p及PTEN/PI3K/Akt通路调控NSCLC的增殖凋亡。项目拟通过体内外系列实验探索并证实hsa_circ_0008602通过miR-148a-3p调控NSCLC发生发展的作用和机制，为临床开发靶向药物提供新的思路和方向。

肺癌包括非小细胞肺癌和小细胞肺癌，是一种严重威胁人类健康的恶性肿瘤，其中比例高达 80%的非小细胞肺癌（NSCLC）死亡率极高且预后差。 环状 RNA（circRNA）作为一类内源性非编码 RNA，在组织中存在表达差异。近年发现， circRNA 具有很多重要的调控功能，例充当 miRNA 海绵体，调控 RNA 结合蛋白等。这些生物学功能使得 circRNA 与疾病的发生发展相关，特别是在肿瘤方面。为探讨 circRNA 在NSCLC发生发展中的作用，项目利用基因芯片技术构建了 circRNA 以及其潜在靶基因表达谱，并运用qRT-PCR分析其在非小细胞肺癌癌组织及其配对癌旁正常组织中的表达，发现ciR-GUCY1A2(原命名为hsa_circ_0008602) 在癌组织及其配对癌旁正常组织中存在明显表达差异，且低表达的 ciR-GUCY1A2与肿瘤大小、 TNM 分期呈负性相关，说明 ciR-GUCY1A2 影响NSCLC的增殖与凋亡。体外细胞和体内裸鼠成瘤证明 ciR-GUCY1A2 可抑制 NSCLC 细胞生长增殖并促进凋亡。 Luciferase 报告基因和FISH实验证实ciR-GUCY1A2 能直接与 miR-200c-3p结合。EdU 及流式细胞术等回复实验显示NSCLC 细胞中上调 ciR-GUCY1A2 能抵抗 miR-200c-3p 上调所导致的肿瘤促进作用。Luciferase 报告基因实验证明 miR-200c-3p与 PTEN 存在碱基互补结合位点。随后的 Western blot 等回复实验证明 ciR-GUCY1A2 能直接与 miR-200c-3p 结合并抵抗miR-200c-3p 对 PTEN 的抑制作用。结果不但有助于揭示ciR-GUCY1A2 在肿瘤细胞增殖与凋亡的作用，而且还能够为寻找抗NSCLC治疗的新靶点、改善其预后提供科学依据。