卵母细胞成熟障碍的致病基因定位研究

人类卵母细胞成熟障碍可导致卵母细胞无法成熟，体内外受精失败无法生育，是一种难治性不孕症，目前在人类尚缺乏卵母细胞成熟障碍的发病机制研究。我们发现了一不孕症家系，先证者3个体外受精周期均表现为卵母细胞成熟障碍。前期我们利用全基因组SNP作为遗传标记对该家系进行连锁分析，初步选定突变基因连锁区间位于6p21.1-6p12.2和10p15.3-10p15.1，后期拟利用高通量全基因组外显子测序技术，对突变基因进行精细定位，并辅以相关功能实验验证，确定致病基因，为卵母细胞成熟障碍的遗传学发病机制和新的诊疗技术的建立提供有最价值的理论依据。

按计划完成本项目研究任务。为探讨卵母细胞成熟机制，本课题组收集了一个不孕症家系，先证者3个体外受精周期均表现为卵母细胞成熟障碍，前期对该不孕家系的13位成员进行了全基因组SNP分型，连锁分析，初步将突变基因定位于6p21.1-6p12.2和10p15.3-10p15.1，又利用高通量全基因组外显子测序技术、PCR、病例对照实验等多种方法，将突变基因锁定为GLT1D1 c.559C>T。经蛋白结构预测，GLT1D1为一糖基转移酶，但无相关文献报道。课题组首先利用免疫组化及real-time PCR技术，从蛋白质和mRNA水平，证实GLT1D1 在卵巢颗粒细胞，膜间质细胞及卵母细胞中均有表达，而后利用R&D Systems开发出的一种多功能非放射性检测方法，对其野生型和突变型蛋白进行了糖基转移酶活检测，确定该基因c.559C>T突变后影响其糖基转移酶活，并具有显性负效应。本研究初步明确了该卵母细胞成熟障碍家系的致病基因，为阐明卵母细胞成熟机制提供了新的线索，为卵母细胞成熟障碍的遗传学发病机制和新的诊疗技术的建立提供有价值的理论依据。