动脉粥样硬化中法尼酯X受体下调巨噬细胞中肝脂酶表达的分子机制研究

The pathogenesis of atherosclerosis (AS) is one of the lipid accumulation in macrophages.Atherosclerosis (AS) is a high mortality of cardiovascular and cerebrovascular disease is closely related to the pathogenesis of lipid accumulation in macrophages .farnesoid X receptor(FXR) could be reduced hepatic lipase (HL) expression, inhibition of lipoprotein uptake, reduce plaque produce. Our preliminary studies found that FXR agonists can be time-and dose-dependent down human liver HL mRNA in protein expression and inhibit HL activity,suggesting that FXR can down-regulate HL transcription in macrophages.Bioinformatics analysis of FXR with HL promoter -217 to-196bp at the existence of binding sites. The combination of these speculated that FXR can be reduced through direct channels of HL transcription in macrophages. This project to be adopted: (a) Construction of the HL gene promoter reporter vector, clear FXR binding sites with the HL gene promoter region; (b) using the ChIP and EMSA experiments, respectively, combined from the body, outside identification FXR and HL promoter activity area; (c) macrophages in vitro experiments and build AS animal models, verify FXR lowered HL expression can reduce the AS plaque produce.Results will initially clarify the mechanisms of FXR regulation of HL molecules is a direct way, and in this way and lipoprotein uptake in macrophages and AS plaques.

动脉粥样硬化(AS)发病机制之一是巨噬细胞中脂质蓄积，而法尼酯X受体(FXR)能够下调肝脂酶（HL）表达，抑制脂蛋白摄取，减少斑块产生。我们前期研究发现FXR激动剂下调人肝脏HL mRNA、蛋白表达水平及抑制小鼠HL酶活性，并有时间和剂量依赖性。推测FXR可下调巨噬细胞中HL转录。我们通过生物信息学分析发现，FXR与HL启动子-217～-196bp 处存在结合位点。结合上述推测FXR可通过直接途径下调巨噬细胞中HL转录。本课题拟采用：①构建HL基因启动子报告基因载体，明确FXR与HL基因启动子区结合位点；②采用ChIP及EMSA实验，分别从体内、外鉴定 FXR与HL启动子活性区域结合；③巨噬细胞体外实验及构建AS动物模型，验证FXR下调HL表达可减少AS斑块产生。结果将初步阐明FXR调控HL分子机制是直接途径，及这种途径对巨噬细胞中脂蛋白摄取和AS斑块的影响。为研制AS药物提供实验依据。

动脉粥样硬化(AS)发病机制之一是巨噬细胞中脂质蓄积，而法尼酯X受体(FXR)能够下调肝脂酶（HL）表达，抑制脂蛋白摄取，减少斑块产生。我们前期研究发现FXR激动剂下调人肝脏HL mRNA、蛋白表达水平及抑制小鼠HL酶活性，并有时间和剂量依赖性。推测FXR可下调巨噬细胞中HL转录。通过生物信息学分析发现，FXR与HL启动子-217～-196bp 处存在结合位点。结合上述推测FXR可通过直接途径下调巨噬细胞中HL转录。本课题主要研究内容：①构建HL基因启动子报告基因载体，明确FXR与HL基因启动子区结合位点；②采用ChIP及EMSA实验，分别从体内、外鉴定 FXR与HL启动子活性区域结合；③巨噬细胞体外实验及构建AS动物模型，验证FXR下调HL表达可减少AS斑块产生。实验已按计划基本完成，取得重要研究进展，现汇报如下：①报告基因检测证实ER10结合位点突变，FXR对HL启动子活性的影响。②ChIP和EMSA 实验证明了在人巨噬细胞中FXR能分别在体内、体外与HL启动子活性区域结合；③巨噬细胞的体外实验中，我们证实了FXR通过调控HL的表达对脂蛋白摄取和泡沫细胞形成具有显著影响。④成功建立了ApoE -/-小鼠AS模型。小鼠主动脉油红O和HE染色发现，GW4064可减少泡沫细胞形成和抑制AS斑块产生 。测定小鼠血液中TC，TG，LDL-C水平发现其含量与GW4064均呈剂量依赖性。同时，主动脉HL免疫组化结果表明，GW4064干预后的主动脉壁及斑块内HL蛋白表达水平明显下降。实验证实了FXR下调巨噬细胞中肝脂酶的表达可减少动脉粥样硬化斑块的产生。因此，我们证实了HL与FXR可能存在结合位点ER10，FXR可能是通过直接途径下调HL转录水平。实验结果初步阐明了FXR调控HL分子机制是直接途径，及这种途径对巨噬细胞中脂蛋白摄取和AS斑块的影响。为研制AS药物提供实验依据。上述结果已在《免疫学杂志》发表论文一篇。SCI论文正在撰写。