不同多态性p27 Val109Gly 生物学特性的研究

p27基因Val109Gly多态性是位于外显子区唯一的高频有意义突变，且包含了其与降解蛋白Jab1结合位点。前期研究发现该位点不同多态性的p27对细胞周期调控及其细胞核内外转运的影响存在显著差异。为进一步阐明p27 Val109Gly的生物学特性，本项目在构建稳定转染细胞株基础上，系统比较转染细胞功能特性的改变。并应用免疫共沉淀结合二维电泳技术比较两种多态性p27蛋白结合谱的差异，筛选关键差异分子，荧光共振能量传递（FRET）法验证两种多态性p27分子与关键差异分子相互作用的动态过程。该研究不仅有助于揭示p27基因Val109Gly多态性在肿瘤发生中的作用机制，而且为临床筛选药物干预靶点提供理论依据。

本项目利用Threading 分子结构模型预测方法分析p27Val109Gly 不同多态性空间构象和表皮生长因子受体EGFR的胞浆域分子突变后空间构象的变化。为进一步阐明p27 Val109Gly 的生物学特性，本研究系统回顾了p27 Val109Gly 在乳腺癌以及所有肿瘤的发病风险的关系（累计病例2083例，对照1716例), 结果发现p27基因V109G基因型频率分布与乳腺癌易感性的不存在相关性（OR＝0.99，95%CI=0.85-1.15)。利用生物信息学相关软件比较这两种p73基因启动子区的CpG岛以及潜在的转录因子结合位点的差异，发现p73基因有两个启动子结构。promoter1序列中含5个CpG岛，promoter2序列中含1个CpG岛。启动子相关软件分析评分在95分以上时，promoter1序列有11个潜在的转录因子结合位点。Promoter2序列有9个潜在的转录因子结合位点，提示p73基因启动子的甲基化区域以及潜在的转录因子结合位点的差异可能是导致转录产物的功能差异的重要因素。并利用生物信息学方法对 HER2(+) 与 HER2(-) 乳腺癌细胞中差异表达miRNAs的功能和信号通路进行系统分析的方法，探讨microRNAs在不同HER2状态中可能发挥的调控作用。通过文献挖掘的方法找到了5个HER(+)/HER(-)乳腺癌microRNAs差异表达数据集，分别包含了22; 32; 3; 38 及62 个差异表达的microRNAs。经过靶基因预测及富集后，得到的不同microRNAs靶基因集分别包括5,734; 22,409; 1,142; 22,293 和43,460 个靶基因。在p27 分子在细胞周期调控作用机制研究中发现，EGFR/HER2受体阻断药物lapatinib可以通过升高FOXO3a、MirK的升高调控p27介导的细胞周期阻滞。对于p27及其相互作用蛋白在细胞周期调控、增殖和凋亡的调控研究不仅有助于揭示p27 基因肿瘤发生中的作用机制，而且为临床筛选药物干预靶点提供理论依据。.本项目按计划完成，共发表SCI论文7篇，核心期刊论文5篇（均标注该项目基金号，申请人均为通讯作者）。