高表达BM88/Cend1脂肪间充质源神经干细胞-水凝胶复合物移植治疗成年大鼠脑撞击损伤的研究

干细胞移植治疗存在着移植细胞体内存活量少，无法按期望方向分化的关键问题，严重影响移植疗效。本课题针对上述热点问题并结合前期的实验结果，拟以ADSCs体外诱导分化的NSCs作为"种子细胞"，同时利用慢病毒载体将BM88/Cend1基因导入种子细胞稳定高表达，再以最佳细胞密度与PuraMatrix混悬共培养，最后将这种包含基因修饰NSCs的水凝胶填充脑软化区空腔内。观察BM88/Cend1基因的高表达对体外培养、体内移植ADSC-D-NSCs的增殖能力和分化方向的导向作用。同时以新型水凝胶作为体内移植干细胞的依附基质，为干细胞在体内创造良好的生存条件。进一步分析颅脑损伤的微环境对干细胞-水凝胶复合物中细胞增殖、分化能力的影响，期望这种基因修饰后干细胞联合新型生物材料的移植手段能提高移植NSCs存活、促进NSCs定向分化为神经元，达到修复、替代缺失神经组织的效果。

体外实验部分计划内容如下：获取并体外扩增成年大鼠骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs），并分别向神经干细胞（neural stem cells，NSCs）方向诱导分化，分别检测其表型及功能。构建慢病毒载体Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFP -BM88/Cend1并进行体外鉴定（测序，表达，细胞转染）。过表达BM88/Cend1基因的ADSC-D-NSCs与不同PuraMatrix混悬共培养，获取最佳细胞/凝胶配比。本部分内容基本完成。.动物体内实验部分计划内容如下：采用控制性脑皮质撞击（controlled cortical impact，CCI）制作标准化的中度脑损伤模型的基础上，应用成体来源NSCs联合生物工程水凝胶材料在损伤7天时于原损伤区行移植术，分别于动物造模成功后6天、移植术后1、2、3、4周进行肢体运用不对称试验、运动评价，移植术后30天行水迷宫实验。移植35天处死实验动物，完整取脑常规石蜡固定，包含损伤灶的脑组织行连续冠状位切片。HE染色后计算损伤所致空腔体积，分析各组损伤恢复情况。免疫组织荧光化学法染色，分析移植细胞的存活和迁移情况，以及损伤灶局部组织修复的病理改变。因工作中本人出外勤，导致实验停滞，同时实验动物出现非正常死亡，实验数据无法按时收集，本部分内容未完成。外出执勤后曾联系贵处，期望能延期结题，但因错过申请最后期限无法达成，特此说明。