骨髓间充质干细胞移植治疗Tourette综合征大鼠机制研究

抽动秽语综合症（TS）是一种常见的儿童慢性神经精神障碍，近年来TS发病率呈上升趋势，难治性病例增多，不能通过传统的治疗方法控制抽动症状，导致终身疾患，严重影响生活质量。在神经科学领域，骨髓间充质干细胞（BMSC）移植治疗中枢神经系统疾病已显示出巨大潜能。本课题组首次将BMSC注入TS大鼠纹状体后观察到TS大鼠的刻板行为减少，推测BMSC移植对TS具有一定的治疗潜能，但BMSC移植治疗TS大鼠的细胞分子机制远未阐明，迄今国内外尚无报道。多认为BMSC通过细胞替代、改善受损局部微环境发挥神经修复功能。本项目中我们将复制TS大鼠自身免疫动物模型，采用分子生物学、免疫组织化学及电化学技术，从细胞替代、神经营养因子、神经递质代谢三个不同角度探讨BMSC移植治疗TS的细胞分子机制，为BMSC移植治疗TS提供理论依据和实践基础。

Tourette综合征（Tourette syndrome,TS）是儿童期的一种常见的慢性神经精神障碍，表现为多发的运动性抽动和发声性抽动，其病因及发病机制迄今未明，近年来TS患病率持续上升，且难治性病例增多，TS的治疗问题始终是本领域研究的重点和难点。.本研究采用骨髓间充质干细胞（Mesenchymal stem cell, MSC）移植的方法治疗TS，进一步阐述MSC移植治疗TS的作用机理。采用立体定向技术向大鼠纹状体内微量灌注抗基底神经节抗体，制备自身免疫TS动物模型；采用密度梯度离心法在体外分离、培养和扩增大鼠MSC，经流式细胞仪鉴定后将MSC标记并移植到TS大鼠纹状体内。在细胞移植后采用免疫组化双染技术检测大鼠脑内MSC的存活及分化情况；通过ELISA及RT-PCR、Western blot技术检测大鼠脑内脑源性神经营养因子（BDNF）及神经生长因子（NGF）、神经营养因子-3（NT-3）水平；高效液相色谱-电化学法、ELISA技术检测大鼠体内多巴胺（DA）、5-羟色胺（5-HT）、去甲肾上腺素（NE）神经递质含量。结果发现：.1..自MSC移植后7天开始TS大鼠的刻板行为减少。.2..移植的MSC在TS大鼠脑内分化为神经前体细胞、神经元、星形胶质细胞，分别呈BrdU及Nestin双阳性、BrdU和MAP-2双阳性、BrdU和GFAP双阳性。.3..TS大鼠体内DA含量增高、5-HT降低，MSC移植能够降低TS大鼠体内的DA水平，但对5-HT、NE水平无影响。.4..TS大鼠纹状体内BDNF、NGF升高，MSC移植能够降低TS大鼠纹状体内的BDNF含量，对NGF、NT-3水平无影响。.本研究的主要创新点：.1..通过MSC移植的方法从细胞水平治疗TS这一慢性神经精神障碍，不同于传统的对症治疗，远期疗效可靠，为难治性TS的治疗开拓了新的视野。.2..从细胞替代、神经营养因子及神经递质代谢的角度阐述了MSC移植治疗TS的作用机理，认为MSC移植对TS大鼠神经功能的改善是通过细胞替代及改善损伤局部的微环境发挥治疗作用。.本研究通过MSC移植的方法从细胞水平治疗TS这一慢性神经精神障碍，为难治性TS的治疗开拓了新的视野；进一步阐述MSC移植治疗TS作用机制，为MSC的临床应用作出科学评估并提供实验依据。.