罗格列酮诱导自噬激活与miR-29b过表达在青光眼滤过性手术抗瘢痕形成中的作用及分子机制

Scar formation of filter channel due to the proliferation of fibrous tissue in Tenon’s is the leading cause of long term failure of filter surgery in glaucoma. It is showed that autophagy involved in pathophysiologic procedure of several fibrosis diseases. Our research approved modulating roles of rosiglitazone and miR-29b to the scar formation in filter surgeries. PI3Kp85a is the target gene of miR-29b, down-regulation of PI3K-Akt through miR-29b overexpression could reduce secretion of type I collagen and proliferation of HTFS. As PI3K-Akt-mTOR is the classic passage of autophagy, it is reasonable to assume that autophagy takes part in scarring procedure which could be inhibited by rosiglitazone. To determine the treating potential by regulating autophagy, expression amount of autophagy and miR-29b in scarring tissue will be detected, relationship of autophagy and rosiglitazone will also be evaluated.

青光眼滤过性术后Tenon’s囊成纤维细胞过度增生使滤过道瘢痕形成，导致手术远期失败率较高。国内外研究证实，调控自噬可抑制组织细胞纤维化，调控PPARγ和miRNA的表达可对自噬水平产生影响。我们前期研究证实罗格列酮和miR-29b对滤过道瘢痕形成具有调控作用，通过下调其所在的PI3K-Akt信号通路，减少HTFs的增殖和纤维化。因PI3K-Akt是自噬诱导经典信号通路的组成部分，我们推测自噬参与了青光眼术后滤过道组织瘢痕化，罗格列酮和miR-29b过表达可诱导自噬激活，抑制纤维化进程。本项目拟通过细胞和动物实验，应用IHC、W-B、透射电镜、荧光显微镜、实时荧光定量PCR等方法检测成纤维细胞及组织的自噬活性、相关基因及信号通路介导因子表达，验证在GFS术后PPARγ激活与miR-29b过表达对自噬的影响，了解两者在自噬调控中的相互作用关系和分子机制，为提高抗青光眼手术成功率提供新的思路。

青光眼滤过性术后Tenon’s囊成纤维细胞(HTFs)过度增生使滤过道瘢痕形成，是造成30%~40%的病人术后失败的首要原因。目前有临床上常用的抗瘢痕药物如丝裂霉素C,5-氟尿嘧啶已取得了不错的眼压控制效果，但副作用多；其他抗瘢痕药物价格昂贵或效果不确定，并未广泛应用于临床。寻找更安全、有效的抗瘢痕形成药物具有非常重要的临床意义。.我们通过细胞实验，应用PCR、WB、自噬双荧光、透射电镜等方法检测HTFs的自噬活性、纤维化相关基因及信号通路介导因子表达，发现罗格列酮能有效抑制TGF-β1诱导的HTFs表型转化。同时，罗格列酮预处理HTFs，能增强其自噬反应并抑制HTFs纤维化水平，其可能调控的自噬通路为Beclin1-VPS34-ATG14L通路。同时miR-29b过表达可诱导自噬激活，抑制HTFs纤维化的进程。通过动物实验，观察GFS术后兔眼眼压、滤过泡存活时间，应用IHC、PCR、WB等方法检测滤过泡组织相关纤维化基因的表达，进一步验证了罗格列酮能有效地抑制滤过道的瘢痕化形成、延长滤过泡存活时间，提高青光眼滤过手术成功率，且其抑制作用可能强于MMC和5-FU。为日后罗格列酮抗瘢痕成形的临床应用转化奠定理论基础。