环孢素A阻止亲环素A调节CD147在细胞表面表达与牙龈肥大的关系

环孢素A(CsA)性牙龈肥大的主要特征是细胞外基质积聚，部分由基质金属蛋白酶(MMP)介导的分解途径失衡所致，但机理尚不清楚。CsA结合蛋白亲环素A(CyPA)具有调节MMP诱导剂CD147表达的特点。本研究拟用HPLC和ELISA方法检测血浆CsA与CyPA浓度；用免疫组化、PCR方法观察CD147、MMP-2、MMP-9在肥大牙龈内表达水平及CD147在细胞内表达部位；用明胶酶谱、PCR、Western blot法观察成纤维细胞分别经CsA、抗CyPA抗体、抗CD147抗体、重组人CyPA、重组人CD147孵育和经抗CD147siRNA转染后，I型胶原蛋白表达、MMP-2及MMP-9表达和活性的差异。探讨CsA与CyPA比值能否作为风险因子预测牙龈肥大发病；明确CsA是否通过与CyPA结合，阻止CD147在细胞表面表达，降低MMP-2及MMP-9表达和活性，导致牙龈组织内胶原过度沉积。

环孢素A（CsA）诱导的牙龈增生（CIGO）是以细胞外基质（ECM）过度积聚为特征的慢性炎症。CsA的细胞内受体亲环素A（CyPA）可以在炎症和活性氧应激的条件下分泌至细胞外，与细胞膜表面基质金属蛋白酶诱导剂（CD147）相互作用，介导炎症反应和促进基质金属蛋白酶（MMPs）的产生。以往研究显示CsA通过打破MT1-MMP与TIMP-2的平衡来影响MMP-2的活化。但CsA对MMP-2调节的具体机制尚不清楚。本研究主要针对CyPA-CD147是否参与了CIGO病理过程中ECM积聚的问题开展了相关研究，主要结果如下：临床部分的实验结果表明CIGO的发生是局部因素与系统因素共同作用的结果，菌斑、牙龈炎症是CIGO的重要临床表现，但两者之间的因果关系尚不清楚。血清CyPA浓度在牙龈增生的肾移植患者中显著降低，是独立于CsA服药剂量和血药浓度之外的CIGO的风险因素，CsA/CyPA比值可以帮助临床预判牙龈增生的发生和发展。CIGO动物模型实验：CsA溶液以30mg/kg剂量喂饲SD大鼠4周后，大鼠牙龈组织增生显著。免疫组化染色结果显示：在大鼠增生牙龈组织中，MMP-2蛋白表达明显降低，CD147和CyPA的蛋白水平变化不显著。细胞学实验：在人牙龈成纤维细胞（HGF）中，CsA（800ng/ml）刺激HGF后MMP-2、MT1-MMP的mRNA和蛋白表达减少，MMP-2活性降低。CyPA、CD147和TIMP-2的mRNA和蛋白表达无变化。当增加外源性的rhCyPA（2ng/ml）后，MMP-2、MT1-MMP的mRNA和蛋白表达增加，MMP-2活性升高。进一步以HGF为研究对象，利用Lipo2000分别介导CyPA和CD147 siRNA转染HGF，24h后实时荧光定量PCR检测目的基因被沉默的同时，MMP-2和MT1-MMP mRNA减少；48h后Westernblot检测MMP-2和MT1-MMP蛋白表达减少，而对TIMP-2mRNA和蛋白表达均没有改变。上述结果初步证明，在人牙龈成纤维细胞中，CyPA和CD147对于MMP-2和MT1-MMP 的蛋白表达具有重要的作用。提示CsA主要通过阻止CyPA与CD147的相互关系，降低了MT1-MMP和MMP-2的表达及活性，参与了CIGO发生过程中牙龈结缔组织内细胞外基质的过度沉积。