Nrip2选择性抑制大肠癌干细胞增殖和致瘤性分子机制和其作用关键靶蛋白鉴定研究

大肠癌是常见恶性肿瘤，大肠癌干细胞的强致瘤性是大肠癌复发和浸润转移的主要原因。阐明大肠癌干细胞致瘤性分子机制和鉴定关键分子靶点是靶向清除大肠癌干细胞治疗的基础和前提。然其致瘤性分子机制目前尚未阐明。我们先前发现Nrip2在CD133+大肠癌细胞中出现显著沉默，而沉默普通大肠癌细胞Nrip2可增加CD133+细胞数；重新表达Nrip2显著抑制CD133+细胞在NOD/SCID鼠的成瘤性。提示沉默Nrip2是促进大肠癌干细胞致瘤性新的分子机制，可能是靶向抑制大肠癌干细胞治疗的一个新的潜在靶点。然目前对Nrip2作用分子机制尚不明了。本研究拟在先前研究基础上，通过酵母双杂交技术筛选和鉴定Nrip2关键作用蛋白，比较Nrip2和其关键作用蛋白对大肠癌干细胞体外增殖、分化和致瘤性的影响，最后鉴定调控Nrip2和其关键作用蛋白的细胞信息通路。本研究为今后研制新的针对肿瘤干细胞分子靶向药物打下扎实基础。

我们先前发现Nrip2是促进大肠癌干细胞致瘤性新的分子机制，干预Nrip2 能是靶向抑制大肠癌干细胞治疗的一个新的潜在靶点，然其分子作用机制尚不明了。 最近的研究证明Wnt通路异常激活是大肠癌发生发展过程中最关键的分子事件之一，因而在本项目中我们着重探讨了Nrip2参与调控Wnt通路的关键靶蛋白及其分子机制。.在本研究中通过逆转录病毒文库和全基因表达差异谱芯片筛选技术，我们首先从大肠癌干细胞中鉴定了一个新的孤儿核受体相关蛋白Nrip2。在原代普通大肠癌细胞中Nrip2表达呈下降趋势，而在原代大肠癌干细胞中Nrip2表达呈明显上升趋势，并且发现大肠癌细胞在异位表达Nrip2后明显促进了大肠癌干细胞体外克隆成球能力。接着体外研究发现Nrip2通过与Frizzled 1C端两个结构域结合而调控Wnt经典通路活性，是一个新的Wnt非经典通路分子。在普通大肠癌细胞中Nrip2通过激活JNK活性而抑制经典Wnt活性，用化学抑制剂阻断JNK活性后可减弱Nrip2对经典Wnt活性的抑制作用；而在大肠癌干细胞中激活的Akt通过磷酸化Nrip2 S34，解除了对JNK的激活作用，并且促进了Nrip2的入核，在细胞核内磷酸化的Nrip2与RORb结合，抑制了后者对HBP1的转录，解除了HBP1抑制TCF4与DNA的结合，从而通过激活经典Wnt通路促进了大肠癌干细胞的自我更新。最后我们还发现Nrip2 T152可能是一个潜在的分子治疗靶点。.本项目取得的成果：已发表SCI论文3篇，修回论文1篇，正在撰写1篇；参加学术交流2次，培养博士研究生1名和硕士研究生2名。