电刺激小脑顶核诱导脑缺血大鼠差异表达miRNAs的筛选及其对潜在靶点Ku70抗凋亡机制的调控

电刺激小脑顶核具有内源性神经保护作用，但其具体分子机制尚未清楚。近年来研究发现，miRNAs参与了细胞增殖、分化、凋亡和代谢等生命过程的调控，并且有研究结果显示miRNAs是缺血预处理诱导耐受中新的调节因子。因此miRNAs成为内源性神经保护研究中新的热点。然而miRNAs在电刺激小脑顶核诱导的脑缺血保护机制中的调控作用尚未见报道。结合文献资料和我们的近期研究，可以推测电刺激小脑顶核的内源性保护机制可能与Ku70抗凋亡活性上调有关，miRNAs可能通过调控Ku70的乙酰化水平而对凋亡途径产生影响。为此，本项目拟利用高通量测序和生物信息学分析方法筛选出电刺激小脑顶核诱导脑缺血大鼠差异表达的miRNAs，并通过体外和体内实验寻找调控Ku70的乙酰化水平的目的miRNAs。从而更加深入地了解电刺激小脑顶核内源性神经保护作用的分子机理和作用靶点,进而为拓展缺血性脑血管病治疗的新途径提供理论依据。

电刺激小脑顶核对其后发生的脑缺血有保护作用，但其具体的分子机制尚未阐明。miRNAs作为一种新发现的基因调控因子参与复杂的调控网络，并且有研究结果显示miRNAs是缺血预处理诱导耐受中新的调控分子。本项目通过深度测序及芯片分析，发现电刺激小脑顶核诱导脑缺血/再灌注大鼠miRNAs的差异表达谱，并通过生物信息学分析筛选出与凋亡有关的miRNAs如miR-29c,miR-124，而且发现了一个新的miRNA，现被命名为miR-676-1。此外，本项目还通过体外验证及体内验证证实，miR-29c通过靶向调控Bir2和Bak1的表达，miR-124通过靶向调控Ku70的表达在电刺激小脑顶核诱导的抗凋亡机制中起作用。本项目的研究结果将进一步从分子水平上深入了解电刺激小脑顶核内源性神经保护作用的机理, 明确电刺激小脑顶核作用的核心靶点,进而为拓展缺血性脑血管病治疗的新途径提供理论依据。