基于“增敏逃逸”机制构建具有协同保护作用的双药纳米微球靶向治疗缺血再灌注脑损伤的效果评价和机制研究

寻找有效的神经保护策略是保证溶栓安全、挽救卒中患者迫切需要解决的问题。兴奋性毒性在缺血脑损伤中起关键作用，近期研究指出，选择性阻断NMDAR2B受体（即包含2B亚单位的兴奋性氨基酸受体）的及其下游死亡通路信号有望成为一种有效的治疗方法。申请者结合文献进展及预实验发现，脑缺血产生的活性氧簇可以增加细胞死亡信号对钙离子的敏感性，而减弱NMDAR2B阻断剂的保护作用；并提出选择性NMDAR2B阻断剂（艾芬地尔）联合抗氧化剂（白藜芦醇）协同保护策略。本研究将从细胞和动物两个水平进一步评价该策略的协同保护效果，并阐明协同机制。此外，半衰期短和脑内浓度低是导致神经保护药物效果不如人意的重要原因。最新研究指出，脑缺血区存在大分子高通透和聚集现象。本研究拟在课题组前期成功构建靶向纳米递药系统的基础上，借鉴肿瘤靶向治疗成果，构建负载白藜芦醇和艾芬地尔的双药纳米微球，通过其在缺血损伤区富集，实现靶向性脑保护。

本课题首先在体外细胞氧化应激模型上进行了细胞保护试验发现白藜芦醇和艾芬地尔具有协同保护作用，探讨分子机制发现艾芬地尔抑制DAPK活化而保护细胞，若加入过氧化氢诱导ROS则其保护作用减弱，DAPK活性增强；艾芬地尔联合白藜芦醇治疗时，则逆转过氧化氢的这一效应。我们进一步采用二亲嵌段共聚物作为载体材料，通过制备抗氧化剂（白藜芦醇）和具有潜在应用价值的NMDA拮抗剂（艾芬地尔）双药纳米微球纳米递药体系，来研究该载药体系对于脑缺血再灌注的保护作用及其可能的作用机制。我们首先采用纳米沉淀法制备了载药微球，并且进行了制备条件的优化。载药微球可通过胞吞作用在细胞内达到更高的药物浓度。在体外细胞和转基因线虫模型上进行了微球抗氧化保护能力的试验，发现该载药微球的具有良好的抗氧化保护能力，明显降低ROS水平，抑制凋亡蛋白的表达。脑缺血再灌注鼠体内试验中，我们证实载药纳米微球可在损伤区富集，发现双药微球明显降低缺血再灌注损伤相关神经功能损伤评分，减少梗死区面积。该课题的研究成果有望为脑缺血再灌注损伤的靶向治疗提供一种新的思路，即将具有协同作用的两药通过具有损伤区靶向性的纳米高分子体系共同投递来获得更佳的保护效果。