基于CREB/GRK3通路探讨木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛逆转食管鳞状细胞癌发生、发展过程及其作用机制研究

Esophageal squamous cell carcinoma (ESCC) is the deadliest form of gastrointestinal malignancies, with a high incidence in China. p-Hydroxylcinnamaldehyde (CMSP) is a novel member of the ethanol extracts of CMS (CMSE). Our previous study had reported, that CMSP can induce differentiation in ESCC cells in vitro and vivo, however the underlying mechanism of the anti-cancer effect of the CMSP on ESCC cells was still unclear. The total proteins were extracted from CMSP treated ESCC cells, and were analyzed by protein spectrum. The result of protein spectrum analysis indicated that the impaired activity of CREB/GRK3 signalling pathway might be the key site regulated by CMSP. So that this study will investigate whether CMSP induces the differentiation of ESCC cells via the CREB/GRK3 signalling pathway by using various molecular biology techniques such as siRNA interference, immunofluoresscence, CHIP, EMSA, and so on. Moreover, this study will further investigate the reversal effect of CMSP on esophageal precancerous lesions and the specific mechanism in mice model. These research results will provide scientific support for the novel use of CMSP as an extract from traditional Chinese medicine for ESCC treatment.

食管鳞状细胞癌（ESCC)是我国常见的消化道恶性肿瘤，发病率高、预后差。中药木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛(CMSP)是一种具有抗肿瘤作用的单体化合物。本课题前期研究发现，CMSP可通过诱导分化作用抑制ESCC细胞的增殖和侵袭活性，但其具体作用机制尚未完全清楚。我们提取了CMSP作用后的食管癌细胞总蛋白，通过蛋白质谱分析及相关研究发现，CREB/GRK3通路活性下降可能是CMSP诱导ESCC细胞分化的关键节点。基于此，本课题拟利用siRNA干扰、免疫荧光染色、染色体免疫共沉淀技术（CHIP）、凝胶迁移率实验（EMSA）等多种分子生物学技术，深入研究CMSP是否通过调控CREB/GRK3通路活性诱导ESCC分化。同时，我们通过构建食管癌前病变小鼠模型，研究CMSP对食管癌前病变的影响。从而全面阐述CMSP对ESCC发生发展过程的逆转作用及其作用机制，为CMSP应用于食管癌综合防治提供科学依据。

食管鳞状细胞癌（ESCC)是我国常见的消化道恶性肿瘤，发病率高、预后差。中药木鳖子乙醇提取物对羟基桂皮醛(CMSP)是一种具有抗肿瘤作用的单体化合物。本课题前期研究发现，CMSP可通过诱导分化作用抑制ESCC细胞的增殖和侵袭活性。基于前期成果，我们通过喂饮含4NQO饮用水，构建了小鼠癌前病变模型，深入研究了CMSP对ESCC发生、进展的影响，并发现对RhoA-MAPK通路的影响可能是其逆转ESCC及癌前病变进展的主要作用之一。并揭示了CMSP对ESCC及癌前病变模型小鼠免疫功能的促进作用，并发现对B7-H4/STAT3途径的抑制作用可能是其促进免疫功能的主要作用机制之一。.同时，我们系统研究了CMSP的毒理作用，发现CMSP对机体各系统可能均具有较小的毒副作用。综上所述，CMSP对小鼠最大耐受量在有效剂量的20倍以上，在本研究范围内，具有相对较小的毒性反应。.我们还对CMSP影响RhoA-MAPK通路下游的可能的关键因子-CREB在ESCC中的表达及其临床意义进行了深入研究，并深入探讨了其在ESCC发生、进展中的可能作用。结果发现， ESCC组织中CREB表达水平较癌旁组织明显增高。组织中CREB高表达的患者往往瘤组织较大、临床分期较晚、更易发生淋巴结转移，同时患者五年总生存率较短而累积复发率较高。.此外，在探讨CMSP抑制ESCC发生、进展机制的过程中，对影响ESCC进展及生物活性的可能靶点miR-429、Bmi-1、IL-24、IL-6及RNF2等的临床意义及生物学功能进行了研究。.从而通过本课题研究全面阐述了CMSP对ESCC发生发展过程的逆转作用及其作用机制，并发现了一系列蛋白分子极具成为肿瘤标记物的潜力，为临床食管癌综合防治提供科学依据。