滤泡辅助性T细胞活化促进重组旋毛虫表位疫苗产生体液免疫的研究

As one of the most popular parasitic zoonoses, Trichinellosis is eliminated through humoral immunity in a great deal. T follicular helper cells (Tfh) are a newly identified CD4+ T cell subset which plays an important role in providing of cognate B cell help. Restricting Tfh cell numbers in germinal center is crucial for optimal selection. Tregs, especially T follicular regulatory cells (Tfr), control the numbers of Tfh cells and humoral immune response. Our group previously constructed a recombinant epitope vaccine (MEP) with Th2 epitope and B cell epitope in series induced protective immunity and long-term antibody responses in mice. It is speculated that Tfh cells may play an important role in supporting B cell responses induced by MEP. To explore the mechanism of Tfh in the humoral responses induced by MEP, firstly we will confirm MEP generate humoral immunity by the assistant of Tfh cells, then investigate the relationship between Th2 epitope and Tfh cells during the immune response. Finally, we will verify the negative regulation of Treg/Tfr on the assistant of Tfh cells. This study will not only verify Th2 epitopes may induce Tfh cells activation and enhance humoral immunity, but also discuss the negative impact of Treg/Tfr on Tfh cells, which will provide experimental evidence for epitope vaccine design and optimization of immune strategy.

旋毛虫病是一种常见的人畜共患寄生虫病，宿主的体液免疫对其清除十分重要。滤泡辅助性T细胞(Tfh)是最近明确的一群真正意义上的辅助B细胞功能的CD4+T细胞亚群,其数量的控制对于最佳的生发中心反应非常重要。Treg细胞（尤其是滤泡调节性T细胞，Tfr）调控着Tfh的数量和体液免疫。本课题组前期构建的由Th2表位与B表位串联组成的重组表位疫苗(MEP)诱导小鼠产生了良好的免疫保护性及持久的体液免疫,推测其中Tfh起到了重要作用。为弄清Tfh在MEP产生体液免疫应答中的反应机制，本研究拟首先证实Tfh辅助MEP产生体液免疫应答；其次探查Th2表位在免疫应答中与Tfh的关系；最后确定Treg/Tfr对Tfh辅助作用的负性调节功能。本研究将证实蛋白Th2表位可诱导Tfh细胞活化而增强表位疫苗引起的体液免疫以及Treg/Tfr对Tfh数量与功能的负性调控，为表位疫苗的设计及免疫策略的优化提供实验依据。

旋毛虫病是一种常见的人畜共患寄生虫病，宿主的体液免疫对其清除十分重要。滤泡辅助性T细胞(T follicular helper cell，Tfh)是辅助B细胞产生抗体的一群CD4+ T细胞亚群。Treg细胞(尤其是滤泡调节性T细胞，T follicular regulatory cell，Tfr)调控着Tfh的数量和体液免疫。本课题组前期构建的由Th2表位与B表位串联组成的重组表位疫苗(multi-epitope protein，MEP)可诱导小鼠产生较高的抗体，推测其中Tfh起到了重要作用。本研究首先发现MEP蛋白免疫组小鼠抗体及脾淋巴细胞分泌的Th2型细胞因子升高、脾及腹股沟淋巴结Tfh及GC细胞比例增加、脾CD4+ T细胞Bcl-6基因(Tfh细胞关键转录因子)表达增强、脾淋巴细胞分泌的IL-21(可促进Tfh细胞分化)增高以及脾切片GC面积增大，证实Tfh在辅助MEP产生体液免疫应答中具有重要作用；在此基础上验证活化的Tfh细胞表型为IL-4+ Tfh2型、IFN-γ+ Tfh1型及IL-21+ Tfh细胞。其次，构建同时含有Th2表位和B细胞表位的MAP-TB以及仅含有B表位的MAP-B多肽疫苗，证实MAP-TB免疫小鼠抗体、脾淋巴细胞分泌的细胞因子、脾及腹股沟淋巴结Tfh、GC细胞比例、脾CD4+ T细胞Bcl-6的基因表达及脾切片GC形成均较MAP-B组增加，说明MAP-TB中的Th2表位通过活化Tfh细胞从而增强多表位疫苗诱导的体液免疫应答。再次，以不同剂量MEP蛋白免疫小鼠，发现脾Tfr及Treg比例均降低，同时Tfh及GC细胞比例增高，说明Tfh/GC细胞与Tfr/Treg之间保持着相对平衡，证实Treg/Tfr对Tfh细胞的数量具有负性调节作用。最后，本课题对三种佐剂QuickAntibody、弗氏佐剂和铝佐剂的免疫效果进行了测定，发现弗氏佐剂组诱导产生最高的抗体效价和Tfh反应，抗体亚型分析显示弗氏佐剂组诱导产生相对平衡的IgG1及IgG2a抗体。本研究证实旋毛虫多表位疫苗MEP通过活化Tfh细胞诱导产生体液免疫应答，并确定了疫苗中的Th2表位在辅助Tfh细胞活化诱导产生体液免疫应答中的重要作用，同时证实Treg/Tfr对Tfh细胞的数量具有负性调节作用。本课题的实施为抗旋毛虫病表位疫苗的设计及免疫策略的优化提供了实验依据。