软枣猕猴桃性别鉴定及两性花类型植株的筛选

软枣猕猴桃(Actinidia arguta Sieb．et Zucc．)为猕猴桃科猕猴桃属落叶藤本果树。分布于东北、华北、西北及长江流域各省，但东三省的资源最丰富，尤以长白山地区较常见。软枣猕猴桃抗逆性强、口感好，还含有多种氨基酸和维生素（Vc丰富），而且具有抗胃癌、削脂减肥和抗衰老的功效。目前世界各国把软枣猕猴桃作为第三代猕猴桃掀起了开发热潮，但是由于软枣猕猴桃是雌雄异株植物，给软枣猕猴桃的人工驯化栽培和育种带来了很多不便。本项目拟通过生理生化差异、染色体组型、同工酶差异、特异蛋白质鉴定及分子生物学鉴定等手段研究鉴别软枣猕猴桃雌雄株性别的有效方法，建立软枣猕猴桃两性花类型植株筛选体系。本研究为软栆猕猴桃性别早期鉴定、两性花类型植株的筛选和新品种选育提供方法和依据，将极大地促进软枣猕猴桃的开发利用进程，而且对本地区优势资源的开发、果品种类多样化和地方经济的发展具有非常重要的意义。

软枣猕猴桃为猕猴桃科猕猴桃属落叶藤本果树。软枣猕猴桃抗逆性强、口感好，还含有多种氨基酸和Vc，而且具有抗胃癌、削脂减肥和抗衰老的功效。目前世界各国把软枣猕猴桃作为第三代猕猴桃掀起了开发热潮，但是由于软枣猕猴桃是雌雄异株植物，给软枣猕猴桃的人工驯化栽培和育种带来了很多不便。本项目拟通过生理生化差异、染色体组型、同工酶差异、特异蛋白质鉴定及分子生物学鉴定等手段研究鉴别软枣猕猴桃雌雄株性别的有效方法，旨在探明软枣猕猴桃两性花类型植株筛选的有效方法。.研究结果表明：1）通过叶间距、皮孔密度、组培苗的长势等形态观察可鉴别成龄树的雌雄株。2）BTB染色法和TTC染色法、POD活性、光合特性等生理生化指标也可鉴别成龄软枣猕猴桃的雌雄株。3）软枣猕猴桃花期在迁移率为0.49处发现了雄株的特征酶带，这对雌花中筛选全两性植株(hermaphrodite, 花形似雌花但所有的花均具有生活力的花粉)类型是可行的。但对软枣猕猴桃实生苗早期鉴定恐怕不会有帮助。4）通过 iTRAQ 标记定量技术，在猕猴桃雌雄株的叶片中一共发现39个差异蛋白质点，上调表达蛋白质为12个，下调表达蛋白为27个。认为甘油醛-3磷酸脱氢酶GAPC2（雌株）和核酮糖1,5二磷酸羧化酶/加氧酶（雄株）是猕猴桃雌雄株性别差异相关的蛋白。5）长白山地区软枣猕猴桃均为四倍体，染色体数为 2n=116，雄株的核型公式为2n=101msat+15sm；而雌株的核型公式为2n=98msat+16sm+2st(均属于2B型)。通过染色体的着丝粒类型、着丝点指数、臂比变化及对称系数可找出雌雄株的差异。6）利用SRAP 分子标记检测结果表明，雌株多态性比率为68.80%，雄株多态性比率为87.00%。聚类分析结果表明，雌雄株的分辨率均达到70%以上，这表明，基于性别相关的SRAP可以有效的分辨出雌雄株。虽尚不能达100%的分辨雌雄株，但此结果完全可以符合现阶段软枣猕猴桃性别鉴定工作的需要。.以上结果表明，我们可以从不同层面有效鉴别软枣猕猴桃雌雄株，但很多方法区别不是很清晰，方法比较繁琐，不利于大量筛选两性花类型植株，而且很多方法是否适用于童期还有待进一步研究证实。本研究为软枣猕猴桃两性花类型植株的筛选提供了科学依据和有效方法。