二黄散抑制高危型人乳头瘤病毒（HPV）免疫逃逸的分子机制研究

宫颈上皮内瘤变（CIN）是与宫颈癌密切相关的一组癌前病变，反映宫颈癌发生发展中的连续过程，目前90%以上的CIN有人乳头瘤病毒（HPV）感染，是宫颈癌发生的始动因素。课题组在中药二黄散对HPV相关的宫颈病变有显著疗效、动物实验对宫颈局部免疫分子有显著作用的初期研究及体外试验雄黄单体抑制宫颈癌胞免疫逃逸分子RCAS1mRNA及HPV16E6、E7表达的基础上,深入探讨该制剂对抑制HPV 免疫逃逸的机制。拟从以下两方面着手:1) 从功能、形态上阐明该制剂对宫颈粘膜中树突状细胞抗原提呈能力的调节作用；2) 合成HPV肿瘤相关蛋白E6/E7重叠多肽,通过ELispot技术检测外周血单个T细胞在多肽刺激下主要的免疫调节因子INF-γ, 了解该制剂对T细胞特异性免疫的协调作用,寻找E6/E7蛋白参与免疫耐受的亚结构，为该制剂防治宫颈HPV持续感染、预防宫颈癌变提供理论依据。

宫颈上皮内瘤变（CIN）是与宫颈癌密切相关的一组癌前病变，反映宫颈癌发生发展中的连续过程，目前90%以上的CIN有人乳头瘤病毒（HPV）感染，是宫颈癌发生的始动因素。本研究通过体外和体内实验观察了二黄散对抑制HPV 免疫逃逸的作用机制。结果发现，二黄散能二黄散能逆转宫颈上皮内瘤变，并能有效清除HPV感染，同时能明显改善伴有HPV感染的CINⅠ患者宫颈局部免疫微环境。其治疗机制为：通过调节Th1/Th2的免疫平衡，增强CD4+细胞、巨噬细胞功能，上调T-bet免疫蛋白、IFN-γ、NO等细胞因子水平。HPVl6感染时，HLA-A蛋白缺失与其状态存在一定关系。二黄散可抑制HeLa及SiHa细胞的生长、增殖和诱导凋亡。我们成功合成HPV肿瘤相关蛋白E6/E7重叠多肽，发现二黄散与E7蛋白分子具有较强的结合能力，可增加HPV16重叠多肽中E7-5(43-57)免疫原性。在此基础上，在小鼠模型中，二黄散可诱导单核细胞（DCs前体细胞）定向分化为功能性(成熟) 树突状细胞（DCs），二黄散诱生的DCs具有明显刺激同种异体T淋巴细胞增殖的能力，且随DCs细胞数量的增加而作用增强。同时二黄散还增强DCs细胞水平的IL-12和IFN-γ分泌水平以及抗原提呈能力，以及DCs的淋巴浸润程度。这些研究结果提示，二黄散能改善HPV感染部位的免疫微环境，增强与HPV病毒E7蛋白分子的结合能力，HPV16特定多肽[E7/5(43-57)]免疫原性，增强DCs抗原提呈能力及功能，从而达到抑制高危型人乳头瘤病毒（HPV）免疫逃逸，阻断宫颈病变及癌变的发生发展。