复方积雪草合剂通过线粒体融合蛋白-2调控系膜细胞增殖防治IgA肾病机制研究

IgA nephropathy（IgAN）is the major cause of chronic renal failure patients on dialysis in China.Mitochondrial fusion protein -2 (Mfn2) is a new regulation on cell proliferation pathway,and plays an important role in the incidence of IgAN mesangial cell proliferation.Centella asiatica compound is the experience side of our department over the years for the treatment of IgAN. Clinical practice has confirmed that it's effective on IgAN,moreover,it can enhance the expression of the gene in the renal tissue of IgA nephropathy model group,effectively inhibit mesangial cell proliferation,but the mechanism is unclear.This study aims to analysis and explicit the role and status of Mfn2 in IgAN developing by observe the expression level of Mfn2 in mesangial cells in experimental and normal rats, as well as in vitro transfection of Ad-GFP-Mfn2 raised Mfn2 gene expression. Drug effects test , respectively, from the cells and the overall level to discuss the role of centella asiatica compound in regulating of Mfn2 gene expression , and clarifies it's effective mechanism in treatment of IgAN.The completion of this subject will provide experimental evidence and lay a scientific theoretical foundation for Chinese medicine treatment of IgAN and other mesangial cell proliferation-related diseases from the characteristics of great importance to the overall regulation of Chinese medicine.

IgA肾病（IgAN）是我国慢性肾衰透析患者的主要病因。线粒体融合蛋白-2（Mfn2）是细胞增殖通路上的一个新调控点，与IgAN系膜细胞增殖的发生具有重要作用。复方积雪草合剂是我科多年来用于治疗IgAN的经验方，临床已证实对IgAN疗效确切，并在前期研究中发现能提高IgAN大鼠模型肾组织中Mfn2的表达，有效抑制系膜细胞增殖，但其具体直接机制尚未完全明确。本研究拟通过Mfn2在不同实验组大鼠和正常大鼠系膜细胞中的表达水平，以及体外转染Ad-GFP-Mfn2上调Mfn2表达，分析并明确Mfn2的表达在IgAN的发生、发展中所起的作用和地位；同时通过药物作用试验，分别从细胞和整体水平阐述复方积雪草合剂对Mfn2表达的调控作用，揭示复方积雪草合剂治疗IgA肾病的作用机理，为中医药治疗IgA肾病及系膜细胞增殖相关疾病提供实验证据和奠定科学的理论基础。

IgAN是导致慢性肾衰竭的主要病因。线粒体融合蛋白2（Mfn2）是细胞增殖通路上的一个新调控点，在IgAN系膜细胞增殖中起重要作用。复方积雪草合剂是我科多年来治疗IgAN且疗效确切的经验方。本研究主要从细胞和动物水平进行实验，分别建立IgAN动物及系膜细胞增殖模型，使用复方积雪草合剂及缬沙坦进行干预，运用Real-time PCR法检测各组Mfn2 mRNA表达量及Western Blot法检测Mfn2、Bcl-2、Caspase-3、Caspase-9、P-Akt、P-Erk1/2、CyclinA、CDK2、P-P27的表达量。同时进行腺病毒转染，研究高表达Mfn2对系膜细胞增殖及药物治疗的影响。使用电镜检测及氧化电极法对肾皮质中线粒体的结构和呼吸功能进行检测。.结果显示：细胞及动物模型均发现，模型组中伴随着系膜细胞增殖，Mfn2 RNA表达下降，与正常组相比P<0.05，药物干预后Mfn2表达升高，与模型组相比P<0.05。Western Blot检测发现：与正常组相比，模型组Mfn2、Caspase-3、Caspase-9，P-P27下降，Bcl-2 、P-Akt、CDK2、CyclinA、P-Erk1/2上升，差异具有统计学意义，药物治疗后Mfn2、Caspase-3、Caspase-9、 P-P27上升，Bcl-2、P-Akt、CDK2、 CyclinA、P-Erk1/2下降，以复方积雪草高浓度组更明显，与模型组相比P<0.05。使用携带Mfn2的腺病毒转染系膜细胞，发现高表达Mfn2可有效抑制IgA1引起的系膜细胞增殖。使用复方积雪草合剂干预后，Mfn2高表达组细胞增殖程度显著低于对照组。电镜检查IgAN组线粒体肿胀，脊消失。及呼吸改变：IgAN模型组（M组）的S3、S4、RCR值与对照组（A组）相比，均降低，且有统计学意义的差异，其中两组间S3值，RCR值有极显著差异（P<0.01）。.从细胞、动物水平证明IgAN中，通过下调Mfn2，抑制 Ras—P13K—Akt凋亡途径，活化Ras-Raf-ERK/MAPK途径参与系膜细胞增殖，而复方积雪草合剂可通过活化Mfn2，进而抑制增殖途径和促进线粒体凋亡途径，来起到抑制系膜细胞增殖的作用。且复方积雪草合剂作用较西药缬沙坦组明显。同时亦发现，在IgAN中，低表达的Mfn2还可通过破坏线粒体结构和呼吸功能参与I