益气养阴法抑制IgA肾病小鼠系膜细胞增殖及S1P相关机制研究

IgA肾病是我国引起终末肾衰竭的主要病因。肾小球系膜细胞增殖在本病的发生、发展中发挥着核心作用。本项目在既往研究基础上，以1-磷酸鞘氨醇（S1P）在系膜细胞增殖中发挥关键作用为切入点，利用BrdU法、shRNA、Real-Time RT-PCR等技术，体内实验鉴于S1P为细胞增殖共有机制，故通过分析系膜细胞增殖与SPK、S1P、EDG5/EDG3的相关性，寻找益气养阴法干预S1P所致系膜细胞增殖的靶点；同时利用体外实验通过检测EDG5/EDG3、Smad2、CTGF，分析益气养阴法对S1P所致系膜细胞增殖后Smad2通路活化的干预作用。通过体内、外两个部分，系统研究益气养阴法抑制S1P介导的IgA肾病小鼠系膜细胞增殖的作用和效应机理，旨在为益气养阴法治疗IgA肾病提供实验证据，亦为益气养阴法治疗系膜细胞增殖相关疾病奠定扎实的基础。

本研究首先在体内实验部分，利用阳离子牛血清和葡萄球菌肠毒素建立IgA肾病大鼠模型。分别给予肾平颗粒、科素亚或安慰剂对照。利用PCNA染色及PCNA western blot观察系膜增生情况。运用Realtime PCR及western blot技术观察S1P通路（SGPP2,SPHK1,S1PR2, S1PR3,CTGF,Smad2）的变化情况。结果发现模型组PCNA、S1PR2, S1PR3, CTGF的表达增加，肾平颗粒和科素亚均能缓解它们的表达。此外肾平颗粒能增加SGPP2mRNA的表达，这可能是肾平颗粒缓解IgA肾病系膜增生的另一机制。.在体外实验部分，利用大鼠系膜细胞系，分别给予S1P和/或肾平颗粒含药血清干预，利用MTT发观察细胞增生情况，Realtime PCR及western blot技术观察S1PR2, S1PR3,CTGF的变化情况，结果发现肾平颗粒含药血清能显著抑制S1P刺激引起的系膜细胞增生及S1PR2, S1PR3表达增加。随即在系膜细胞同时转染S1PR2, S1PR3，另其过表达，发现肾平颗粒含药血清的此项作用消失，故证实肾平颗粒抑制大鼠系膜细胞增生的机制之一为抑制S1PR2, S1PR3的表达。.综合体内外实验结果，本研究证实肾平颗粒通过抑制S1PR2, S1PR3及下游CTGF的表达，发挥其抑制IgA肾病大鼠系膜细胞增殖的作用。.本课题目前已发表国内核心期刊一篇，另有一篇已被JASN接受，一篇被国内核心期刊接受，另一篇已投BMC Complementary and Alternative Medicine，一篇已投Kindey Int。成果以壁报的形式2次参展于全国性会议，其中一次获优秀壁报奖。培养硕、博士各一名。