乳制品加工中产生的潜在新型雌激素干扰物的非定向筛查与鉴定

The screening and identification of potential new-type estrogenic disruptors produced during the food processing is the research basis and technical support of the area of risk assessment and safety control. The influence of estrogenic disruptors on the ecological environment and human health has aroused continuous wide attention. The various related measures of food safety management and control mainly focused on the identified environment-source estrogenic disruptors. Due to the variety in kind, diversity in structure, complication of generation mechanism, and the complicated processing of food and its components, there are high probability to produce new-type and high-risk estrogenic disruptors. To achieve the sensitive and non-directive screeing of newly produced potential estrogenic disruptors, the preparation of estrogen receptors with excellent performance is the key. For the current problem of non-enough broad of the recognition scope and poor stability, cocktailed human recombinant receptor will be used to establish the high-sensitive and high-throughput non-directive rapid screening method, and carry the screening study of the new-type estrogenic disruptors produced during the processing of dairy product, further identify it by infrared spectrum, mass spectroscopy and magnetic-resonance. The above study can promote the transfer of food safety management from "negative response" to "positive insurance", and better ensure the safety quality of dairy product.

食品加工过程中产生的潜在新型危害物的筛查与鉴定是风险评估及加工安全控制领域的研究基础和技术支撑。雌激素干扰物对生态环境和人体健康的影响引起了持续广泛关注。而当前与之相关的各种食品安全管理与控制措施主要针对已识别鉴定的环境来源雌激素干扰物。由于雌激素干扰物种类繁多，结构差异大，生成机制复杂，加之食品组分及加工过程复杂多样，食品加工过程中极有可能产生新型的风险较高的雌激素干扰物。为实现对加工过程中新产生的潜在雌激素干扰物的高灵敏、非定向筛查，获取性能优异的雌激素受体是研究的关键环节。针对目前雌激素受体识别范围不够宽、稳定性差的问题，本研究拟采用鸡尾酒式人重组受体建立高灵敏、高通量的非定向快速筛查方法，对乳制品加工中产生的新型雌激素干扰物开展筛查研究，进一步采用红外光谱、质谱、核磁等加以准确鉴定。上述研究可促进食品安全从“被动应对”向“主动保障”转变管理策略的实现，更好地保障乳制品的安全质量。

项目制备了识别能力强、可识别范围广、更接近人类雌激素受体性能的重组受体，建立了以固相萃取柱、试剂盒、试纸条等为方法载体的雌激素干扰物非定向快速筛查和检测方法，并成功将其用于乳制品中潜在未知雌激素干扰物的筛查和鉴定。主要取得了以下研究成果：.1、建立了雌激素干扰物的富集净化、筛查及检测方法：制备了重组受体α，协同利用商品化重组受体β，建立了基于鸡尾酒式重组受体的固相萃取柱法、鸡尾酒式重组受体-胶体金比色法、鸡尾酒式重组受体ELISA法、重组受体α-胶体金比色法、重组受体α固相萃取柱法等雌激素干扰物筛查方法，操作简单，检测时间短，可实现雌激素干扰物的快速筛查；建立了基于MCF-7细胞增殖、重组酵母细胞的雌激素干扰物筛查方法，灵敏度高，可实现多种雌激素干扰物的筛查；建立了基于分子印迹聚合物的17β-雌二醇快速检测方法，检测限为0.25μg/L；建立了基于黑磷纳米材料光热效应的17β-雌二醇免疫渗滤试纸条检测方法，检测限可达0.104ng/mL；建立了基于磁珠固定靶标SELEX方法筛选己烯雌酚适配体的方法，最终得到2条与目标物结合力强、特异性高的适配体，其解离常数分别为176.33 nM、141.25 nM。.2、完成了乳制品中雌激素干扰物的筛查和鉴定：利用建立的雌激素干扰物筛查方法对市售10个不同品牌的乳制品进行雌激素干扰物筛查，其中1个样品检测到雌激素干扰活性，经鉴定为大豆苷元，浓度约为0.58mg/g，常规饮食摄入对消费者健康产生的潜在风险较小；对模拟不同热加工条件的样品进行雌激素干扰物筛查，在以葡萄糖和精氨酸作为反应底物，120℃加热120 min后的样品中筛查到雌激素干扰物活性，经鉴定为DIBOA-glc。.项目针对乳制品加工过程中可能产生的潜在雌激素干扰物开发了高灵敏、高通量的非定向筛查方法，已开展的活性筛查及结构鉴定工作可为此类危害物的风险监测与评估提供理论基础与技术支撑，并对乳制品产品质量的提升及相关人群健康保障具有重要的现实意义。