干细胞向视网膜色素上皮分化过程中相关miRNAs及其对JUN调控的研究

研究证明miRNAs对胚胎干细胞（ESCs）分化的调控具有重要作用。本项目是在前期对人视网膜色素上皮(RPE)细胞miRNAs筛查及其对相关miRNAs功能初步研究取得一定结果基础上，以ESCs、胚胎干细胞源性色素上皮细胞及胎儿RPE细胞为研究对象，模拟ESCs向RPE分化的三个阶段，研究相关miRNAs变化规律，并通过转染技术进一步识别验证具有促分化作用的miRNAs。此外，前期实验发现miRNAs可能与JUN基因结合，导致细胞增生被抑制，从而促进细胞分化，因此本项目将检测分化相关的miRNAs对JUN的影响，验证JUN是否为其靶基因之一，进一步探讨miRNAs参与ESCs向RPE细胞诱导分化的机制。本项目期望从miRNAs的角度为ESCs向RPE细胞的定向分化技术提供经验积累，为获得大量较高纯度的RPE细胞提供新途径，并为干细胞移植应用于视网膜疾病的再生疗法提供理论基础。

近期研究已显示人胚胎干细胞（hESCs）分化为视网膜色素上皮（RPE）进行替代治疗的临床应用优势，分化体系的优化备受关注。本项目通过分析hESCs向RPE细胞分化各阶段miRNAs变化规律, 发现大部分miRNAs在分化过程的一定时期起作用，具有时空性；筛选出具备应用优势的促分化miRNAs（miR-204、211和302），这些miRNAs呈持续单一变化趋势，靶向CTNNBIP1、JUN 和TGFBR2 调控分化。通过miR-204、211过表达，miR-302抑制表达，RPE 前体细胞数量和RPE特征性基因表达增多，可提高ESCs向RPE细胞的分化效率，为获得大量较高纯度的hESCs源性RPE细胞提供新途径。本项目结果在国际会议发言交流，发表文章4篇，3篇被sci 收录，1篇发表于《中华眼底病杂志》。