盐生海芦笋嗜盐真菌抗肿瘤活性成分研究

嗜盐菌是一类只有在一定浓度的盐介质中才能良好生长的极端环境微生物，其活性次级代谢产物罕见报道。从高盐环境中分离的4株嗜盐/耐盐真菌次级代谢产物中鉴定了9个新化合物及其它33个代谢产物，表明：特殊的生存环境必将产生结构独特的代谢产物。鉴于此，本项目将继续研究嗜盐真菌次级代谢产物中的活性成分，从源于海芦笋的内生真菌中分离鉴定抗肿瘤活性化合物。采用流式细胞术，以细胞周期抑制和细胞凋亡诱导为活性指标，结合化学筛选方法，获得有抗肿瘤活性的嗜盐菌株；结合流式细胞术和现代分离手段，跟踪分离其中的活性化合物；应用现代波谱技术和化学手段阐明化合物的化学结构；测定化合物对肿瘤细胞的增殖抑制、细胞周期抑制及其凋亡诱导活性，进而以PKC为作用靶点，研究化合物的抗肿瘤活性，获得选择性抑制PKC的抗肿瘤活性化合物。为深入研究具有新结构、高选择性的抗肿瘤活性先导化合物、开发新资源奠定基础。

本项目以抗肿瘤活性为指标，结合化学方法，比较系统的筛选了源于海水蔬菜－盐生海芦笋的内生真菌，对具有抗肿瘤活性的真菌进行发酵，采用各种分离方法分离其中的化合物，应用现代波谱技术和化学手段阐明化合物的化学结构，测定化合物对数种肿瘤细胞的增殖抑制与细胞毒活性，并以PKC为作用靶点，筛选其中具有选择性抑制PKC 靶点的抗肿瘤化合物，同时，对盐生海芦笋的化学成分进行了研究。具体包括（1）共从海芦笋中筛选出内生真菌152株，采用分子生物学与形态学相结合的方法鉴定了15株内生真菌（任务指标10株），包括5株耐盐真菌，并且分离到一株新的产油脂内生真菌Salicorn 5，鉴定为毕士海篷子小克银汉霉Cunninghamella bigelovil，该菌能够产生大量的不饱和脂肪酸，特别是盛产高价值的γ-亚麻酸，为工业化生产富含γ-亚麻酸的油脂提供了一株潜在菌株；（2）系统研究了8株活性真菌和海芦笋的化学成分，获得了62个化合物（任务指标研究6株真菌化学成分，获得30-50个化合物），其中发现新化合物6个，新天然产物1个，化合物结构类型涉及甾醇、生物碱、黄酮、糖苷等。活性测试结果表明，2个新化合物具有强的细胞增值抑制活性，3个新化合物具有弱的细胞毒活性，1个新天然产物具有中等的细胞增值抑制活性，7个已知化合物具有强的细胞毒活性，4个已知化合物具有中等的抗肿瘤活性；1个已知化合物具有PKC抑制活性, 另外，两个已知化合物具有强的抑菌活性。（3）发表研究论文15篇，其中SCI论文4篇，中文核心期刊论文11篇（任务指标3－5篇论文）；（4）申请发明专利3项（任务没有这项指标，属超额完成）。.该研究结果说明，源于海芦笋的内生真菌能够产生结构新颖、活性多样的次级代谢产物，且部分真菌能够产生与宿主海芦笋相同或相似的化合物，为深入研究嗜（耐）盐真菌的代谢机制，丰富极端微生物的多样性及其与宿主的关系提供了物质基础。