猪札幌病毒受体鉴定研究

Sapovirus（SaV ）, a positive single strand RNA virus belonging to Caliciviridae,is one of the important non-bacterial pathogens cause human, pig and mink and other susceptible animals suffering from acute gastroenteritis. Fecal-oral transmission of the infection poses threats to human and animal health. Previous studies confirmed SaV strains isolated from porcine and humans are highly homologous, suggesting that SaV may be a zoonotic pathogen.To date, receptors for SaV infection on host cell surface the is still unknown. In view of this, this proposed study aims to use radiolabeled porcine SaV Cowden strain to infect LLC-PK cell. Receptor is initially investigated by enzymic digestion of the cells. VOPBA, coimmunoprecipitation combining with LC-MS are used to determine the receptor; Infection blocking experiment is used to verify the receptor; Recetpor distribution in vivo will be studied in order to reveal the SaV host specificity and tissue tropism.This study is hoped to explain the SaV virus infection and immune mechanism.

札幌病毒（Sapovirus,SaV） 属杯状病毒科单股正链RNA病毒，是导致人、猪和水貂等多种易感动物罹患急性胃肠炎的重要非细菌性病原之一，主要经粪-口途径传播，对人畜健康构成一定威胁。研究表明，某些猪源SaV和人SaV毒株高度同源，这提示SaV可能为人畜共患病病原。迄今为止,SaV在宿主细胞表面的受体依然未知。有鉴于此，本课题以目前唯一能体外培养的猪SaV Cowden毒株为研究材料，测定经放射标记的SaV毒株与易感细胞LLC-PK在经酶及多种试剂处理前后的结合活性、感染性的变化以确定受体性质；VOPBA法确定受体分子量；免疫共沉淀、LC-MS等方法鉴定受体；病毒感染阻断实验和受体重建实验验证受体；分析受体在猪体内的组织分布和表达丰度。为揭示SaV的宿主特异性和组织亲嗜性，从分子水平阐明SaV病毒感染与免疫机理，探索SaV可能的跨种间感染与传播等科学问题提供理论依据。

札幌病毒（Sapovirus，SaV）属杯状病毒科单股正链RNA病毒，是导致人、猪等多种易感动物罹患急性胃肠炎的重要非细菌性病原，主要经粪口传播。某些猪源SaV与人源SaV表现为很高的同源性，这意味着该病毒存在着潜在的公共卫生问题，对人类的健康和畜牧业的生产造成巨大危害。本研究以唯一能体外培养的猪SaV Cowden毒株为研究材料，研究SaV靶细胞受体特点；对我国流行的代表毒株CH-sav1-ah和重组毒株p2进行了全基因组序列分析和重组分析，构建SPF小型猪SaV动物疾病回归模型，为深入研究SaV在人和动物、动物与动物之间跨种间感染与传播机制、临床诊治，综合防控等方面奠定基础。主要研究内容和结果如下：.（1）在首次报道猪SaV在中国猪群流行的基础上，通过对华东、华南、华中、中原、西南等地区猪SaV感然流行病学调查证明:我国猪SaV主要流行毒株为GIII、GVIII、GX三种基因型，该病毒可引起各个年龄段猪感染，我国大部分地区存在不同程度的流行。对代表毒株CH-sav1-ah和重组毒株p2进行了全基因组序列分析和重组分析，在国内首次发现可引起仔猪腹泻的一株重组毒株（国际上第二个被发现的重组株）。.（2）以国内分离到的猪SaV（中国猪Ch-sw-sav1）为攻毒株，通过口服感染SPF级巴马小型猪方法，模拟自然感染发病过程，建立猪SaV动物疾病回归模型，观察猪感染SaV后的主要临床症状、生理病理变化及RT-PCR检测病原在各组织器官分布情况，探索Sav感染猪后，疾病的发生、发展和转归规律，为病原学、流行病学、临床诊断、综合防治等研究奠定基础。.（3）以唯一能细胞培养的猪SaV Cowden毒株为研究材料，采用VOPBA法、质谱和Co-IP法，鉴定了猪SaV在易感细胞LLC-PK1细胞表面受体。通过VOPBA和Co-IP法进行受体的筛选，并对目的条带用质谱方法进行蛋白质组分鉴定，结合已有的数据进行分析后得到多个候选蛋白。选取MHC-1进行进一步验证。Co-IP结果显示，MHC-1分子能够与Cowden毒株相互作用。