siRNA技术在斑马鱼中的建立和应用

本项目以模式生物斑马鱼为材，以外源报告基因及5－8个功能已知的斑马鱼内源基因为靶基因，分别选1－2个靶位点，设计正反义引物，与U6启动子相连后，克隆至T载体－此即siRNA表达质粒。将表达siRNA的质粒显微注射至斑马鱼早期胚胎，追踪观察胚胎发育，结合原位杂交及切片等方法，探索载体介导的siRNA在斑马鱼胚体中是否具有特异抑制靶基因表达的作用。在此基础上，进一步研究不同靶位点的选择（每个基因选6－8个靶位点）与siRNA干扰效果的关系；并用siRNA技术研究4－6个斑马鱼新基因的功能。目的是在斑马鱼系统中建立快速方便鉴定基因功能的技术途径，为大规模开展基因功能研究奠定基础。