补肾祛湿法对雌孕激素共诱导妊娠肝内胆汁淤积症胆汁酸排泌通路的调控

在前期临床与实验基础上，采用孕酮和17-α乙炔雌二醇诱导产生妊娠肝内胆汁淤积症模型，通过蛋白印迹、荧光实时定量、免疫染色激光共聚焦方法，观察补肾祛湿方对孕鼠肝脏中与胆汁酸摄取、运载、排泄有关的主要载体蛋白OATP、NTCP、BSEP、MRP-2、AQP8转录、表达及分布的影响。体外分离培养肝实质细胞，采用雌二醇-17β-D-葡萄糖醛酸化物及硫酸孕激素代谢产物（PM4-S）共同诱导产生胆汁淤积症模型，观察补肾祛湿方含药血清干预前后，肝实质细胞上述载体蛋白转录、表达及分布的变化。阐明补肾祛湿法对病理状态下胆汁酸转运膜蛋白的调节作用，及补肾祛湿法对妊娠肝内胆汁淤积治疗作用的分子机制。

本研究采用体内与体外实验相结合的方法观察了补肾祛湿法方药茵黄合剂及其含药血清对17-α乙炔雌二醇(17α-ethinylestradiol,EE)诱导肝内胆汁淤积症模型大鼠和雌激素代谢产物雌二醇17β-D葡萄糖苷酸(estradiol-17β-D-glucuronide,E17G诱导胆汁淤积肝细胞胆汁酸转运蛋白表达的影响。体内实验结果发现，17-α乙炔雌二醇可增加大鼠血清TBA、TBil和ALP含量，引发肝细胞空泡变性和脂肪变性，导致肝细胞超微结构线粒体和内质网损伤，可降低胆汁酸转运蛋白MRP2、BSEP、AQP8、NTCP和OATP的表达，而茵黄合剂干预可降低大鼠血清TBA、TBil和ALP含量，改善肝细胞损伤，增加胆汁酸转运蛋白MRP2、BSEP、AQP8和NTCP的表达，但没有增加OATP的表达。体外实验研究表明，雌激素代谢产物E17G诱导的大鼠胆汁淤积肝细胞MRP2、BSEP、AQP8、NTCP和OATP的表达下降，而茵黄合剂含药血清干预可增加这些胆汁酸转运蛋白的表达。这些研究结果提示雌激素及其代谢产物是肝内胆汁淤积症发生的重要因素，而补肾祛湿法方药茵黄合剂可能通过增加胆汁酸转运蛋白的表达，发挥治疗妊娠肝内胆汁淤积症的作用。