雌激素对妊娠肝内胆汁淤积症母体肝细胞胆汁酸转运蛋白的调控机制研究

Intrahepatic cholestasis of pregnancy (ICP) can increase preterm birth rate and perinatal child mortality. The abnormal elevation of estrogen lever is one of its causes, but the exact mechanism is unclear. The serum bile acid levels of ICP are closely related to intrahepatic bile acid transporter disorders, but the cholestasis formation mechanism of ICP is not clear. Lots of studies have shown that estrogen can regulate the expression of miR-148a, the expression of pregnant xenobiotic receptor (PXR) is regulated by miR-148a, and bile acid transporter protein MRP3 can be regulated by PXR. Then we speculate that estrogen may act on the expression and activity of bile acid transporter protein through the regulation of miR-148a pathway, finally results in the intrahepatic bile acid transporter obstacles. This research project intends to explore the mechanisms of ICP and provide the novel theoretical and practical basis for more effective treatment of ICP through the combination of clinics, tests in vitro and animal experiments by using cell and molecular biology techniques.

妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）可增加早产率、围生儿病死率。雌激素异常升高是其发病原因之一，但确切机制尚不清楚。ICP患者血清胆汁酸水平增高与肝内胆汁酸转运障碍密切相关，但目前ICP患者胆汁淤积的形成机制尚不明确。研究表明，雌激素可调控miR-148a的表达，孕烷X受体（PXR）的表达受miR-148a的调节，胆汁酸转运蛋白MRP3的表达则主要受PXR的调控。故此，雌激素可能通过对miR-148a的调控而调节胆汁酸转运蛋白的表达和活性，致肝内胆汁酸转运障碍。本研究拟结合临床、体外试验及动物实验，采用细胞和分子生物学技术，探讨妊娠肝内胆汁淤积症的发生机制，为妊娠肝内胆汁淤积症的有效治疗提供新的理论和实验依据。

妊娠肝内胆汁淤积症（ICP）对围产儿危害极大。阐明ICP孕妇胆汁淤积形成的分子生物学机制，进行靶向干预，对改善胎儿预后具有重大意义。有研究表明雌激素可调控miR-148a的表达， miR-148a能直接调控下游靶基因孕烷X受体（PXR）的表达，后者能参与调节肝细胞膜上多种胆汁酸转运蛋白，如多药耐药相关蛋白3（MRP3）。综上推测，雌激素可能通过调控miR-148a表达影响胆汁酸转运系统PXR/MRP3，最终导致肝内胆汁淤积的发生。本课题研究雌激素通过miR-148a/PXR/MRP3在ICP孕妇、肝细胞及雌二醇诱导的胆汁淤积小鼠模型中的表达，探索雌激素诱导ICP是否与miR-148a/PXR/MRP3信号途径相关。.方法：第一部分检测25例正常孕妇和25例ICP孕妇血清中雌激素、miR-148a的水平和总胆汁酸的浓度。第二部分采用外源性雌二醇孵育肝细胞株LO2，通过浓度阈值和时效性研究及采用慢病毒载体介导的RNAi技术，研究雌二醇和miR-148a在LO2中对胆汁酸的调控作用；使用PXR特异性激动剂并检测雌二醇诱导的LO2中PXR和MRP3的表达。第三部分通过建立孕鼠ICP模型，并检测其肝脏及胎盘中miR-148a/PXR/MRP3的表达。.结果：第一部分ICP患者血清中雌激素、miR-148a和TBA较正常孕妇明显升高，且两两均呈正相关。第二部分雌二醇能上调LO2中总胆汁酸浓度及miR-148a表达，且呈浓度和时间依赖性；阻断miR-148a的表达，则雌二醇诱导LO2产生高浓度胆汁酸的作用明显减弱；雌二醇可下调LO2中PXR的表达水平，阻断miR-148a的表达可明显抑制雌二醇对PXR的下调作用；激活PXR的表达，可以抑制雌二醇诱导LO2产生高浓度胆汁酸。第三部分建立ICP孕鼠模型，其肝脏及胎盘miR-148a表达上调、PXR表达下调、MRP3表达上调，且具有相关性。.结论：ICP患者血清中miR-148a明显升高。在肝细胞中当阻断miR-148a的表达时，雌激素对肝细胞失去胆汁淤积的诱导作用。降低miR-148a的表达或增加PXR的表达均可缓解雌激素诱导的胆汁淤积状态。在ICP孕鼠模型中，雌激素水平升高诱导miR-148a的高表达，抑制其靶蛋白PXR，从而增加MRP3表达，最终导致ICP发生。