基于中性粒细胞胞外诱捕网（NETs）形成和降解探讨化腐生肌法治疗糖尿病足溃疡的机理

Diabetic foot ulcers persistent refractory, resulting in high morbidity and mortality. Diabetes activates the neutrophil extracellular traps (NETs), which is one of the main causes of delayed wound healing and an important source of "rot". In the early studies, it has been found to promote neutrophil apoptosis, but whether it affects NETs is not yet clear. Thus, the effective prescription of Huafu Shengji therapy on the treatment of chronic skin ulcers (Yang syndrome) patients with localized NETs (free DNA, citrullinated histones, PAD4, NE, MPO) regulation), and to explore the effect of Zhuhong ointment on the formation and degradation of NET and its signal transduction pathway (Raf-MEK-ERK and RIPK1-RIPK3-MLKL signal transduction pathway) And macrophage co-culture to simulate the local inflammatory environment of the wound, to explore the effect of Zhuhong ointment on the formation and degradation of NETs in inflammatory state. The purpose of this study is to study the role of Huafu Shengji therapy by NETs, and to provide experimental evidence for the clinical treatment of diabetic foot ulcer.

糖尿病足溃疡迁延难愈，造成极高的致残率和致死率。糖尿病激活了中性粒细胞生成中性粒细胞胞外诱捕网（NETs），过多或持续存在的NETs是创面愈合迟缓的主要原因之一，也是“腐”的重要来源。化腐生肌法有促愈合作用，前期研究发现其可促进中性粒细胞凋亡，但其是否影响了NETs尚不明确。因此通过化腐生肌法的有效方剂朱红膏对糖尿病足溃疡（阳证）患者创面局部NETs（细胞外DNA，H3cit，PAD4，NE和MPO）的调节作用；通过体外高糖条件下PMA刺激中性粒细胞，探索朱红膏直接对NET形成和降解及其信号转导途径（Raf-MEK-ERK和RIPK1-RIPK3-MLKL信号转导通路）的影响；把形成NETs的中性粒细胞和巨噬细胞共培养模拟创面局部微环境，探索朱红膏对炎症状态下NETs降解的影响。本课题通过NET形成和降解及信号转导通路研究化腐生肌法的作用环节，为临床治疗糖尿病足溃疡提供实验依据。

糖尿病足溃疡迁延难愈，造成极高的致残率和致死率。糖尿病激活了中性粒细胞生成中性粒细胞胞外诱捕网（NETs），过多或持续存在的NETs是创面愈合迟缓的主要原因之一，也是“腐”的重要来源。化腐生肌法有促愈合作用，前期研究发现其可促进中性粒细胞凋亡，但其是否影响了NETs尚不明确。本研究从临床和体外实验（I型、Ⅱ型糖尿病小鼠和健康人的中性粒细胞）层面，通过朱红膏对糖尿病足溃疡患者创面及体外高糖条件下PMA刺激中性粒细胞形成NETs模型进行研究，证实朱红膏可以直接抑制中性粒细胞NETs形成(free DNA, cit-H3, PAD4, MPO)，其机制是抑制ERK通路的激活，并抑制炎症因子的分泌，增强其吞噬杀菌功能；把形成NETs的三种中性粒细胞和M1、M2巨噬细胞共培养模拟创面局部炎症微环境，发现朱红膏可促进M2型巨噬细胞吞噬NETs，抑制M1型巨噬细胞释放细胞外DNA，同时下调炎症因子的分泌，证实朱红膏促进炎症状态下NETs的降解。提示朱红膏通过抑制中性粒细胞胞外诱捕网形成和促进炎症状态下NETs的降解，从而减轻创面的炎症反应，促进糖尿病足溃疡创面愈合，阐明“化腐”的机理以及糖尿病足溃疡创面愈合的主要作用机制，从而提升“化腐生肌法”的科学内涵，为临床治疗糖尿病足溃疡提供实验依据。