改良siRNA文库筛查黑色素瘤抗耐药基因的研究

Natural drug resistance and acquired drug resistance is a bottleneck for melanoma treatment, to overcome the resistance is the key to promote melanoma chemotherapy. Target screening is an important method to study on drug resistance of tumor, has its special superiority in identifying the key gene of treatment target and drug resistance . Our project is a novel target screening study, a modified siRNA library will be introduced, a drug resistance cell model against current first-line melanoma chemotherapy drugs will be established, consist of both natural drug resistance and acquired drug resistance. Based on these, we can directly search for drug response related, anti drug resistance gene, bypassing the searching of drug resistance gene. Next, we will carry on the research of function verification and anti drug mechanism of the screened gene. This exploratory study will adopt a new method, directly search for anti melanoma natural and acquired resistance genes ,should be more close to the drug development and clinical treatment. We hope to find out some strong anti drug resistance gene to promote melanoma chemotherapy. At the same time, to provide some new theoretical bases for the research of tumor drug resistance.

天然耐药与继发耐药是黑色素瘤治疗的瓶颈，提高黑色素瘤的化疗效果，要从对抗天然耐药和继发耐药两方面着手。靶点筛查是肿瘤耐药研究的重要手段，在寻找新的药物治疗靶标和锁定耐药的关键基因方面有其特殊的优越性。本项目在靶点筛查中引入一种改良siRNA文库，针对黑色素瘤化疗一线用药，建立天然耐药和继发耐药一体化细胞模型，绕开对耐药基因的寻找，直接靶向筛选与药物反应性正相关的，抗耐药的强效基因，并对所筛出基因进行功能验证和机制研究。本研究探索性地用新方法，直接从抗耐药角度寻找对抗黑色素瘤天然和继发耐药的基因，更接近于药物研发和临床治疗的实践。期待能针对黑色素瘤化疗发现一些强效抗耐药基因，推进黑色素瘤化疗的新药研发、耐药预防、联合用药和补充治疗。同时希望能对肿瘤的耐药机制研究提供一些新的理论依据。

天然耐药与继发耐药是黑色素瘤治疗的瓶颈，提高黑色素瘤的化疗效果，要从对抗天然耐药和继发耐药两方面着手。靶点筛查是肿瘤耐药研究的重要手段，在寻找新的药物治疗靶标和锁定耐药的关键基因方面有其特殊的优越性。本项研究构建完成一个可追踪的逆转录病毒寡核苷酸文库，将该文库感染人黑色素瘤A375 细胞，获得单细胞稳定表达单个特异性siRNA 的人黑色素瘤A375 细胞。在文库稳定转染后的A375 细胞中筛选出对Vemurafenib耐药的细胞克隆。发现A375VR-clone与野生型A375在细胞生物学行为方面有明显的差异。测序耐药细胞克隆中的siRNA 序列，发现该寡合苷酸序列可能是通过某种未知的小分子核酸调节方式导致了A375的耐药。具体机制正在进一步的研究之中，其结果可能是对小分子RNA在耐药调节中新的机制的原创性突破性发现。本研究还从药物再定位的思路出发，在细胞水平和动物水平发现廉价安全的抗寄生虫药氯硝柳胺对人黑色素瘤细胞有毒性，在细胞培养和动物在体水平，氯硝柳胺都能以较低的生物安全剂量表现出良好的抑制黑色素瘤的作用，并且对一线用药维罗菲尼的耐药株表现出了良好的抑瘤效果，提示氯硝柳胺有可能成为黑色素瘤患者，尤其是耐药患者的新选择。