肺复康合剂通过TGF-β1/Smad3通路及相关miRNAs抗肺纤维化的作用机制

Pulmonary fibrosis is a heterogeneous group of lung disease characterized by disorder of alveolar structure and categorized as one of refractory diseases by WHO, whose onset is not obvious and the prognosis is poor. It belongs to the "pulmonary arthralgia" category in traditional Chinese medicine, with deficiency in origin and excess in superficiality. Our research group made the Feifukang Mistura by using astragalus as the main ingredient, together with other Chinese herbs, such as houttuyniae,ligustici, salvia miltiorrhiza, lumbricus and licorice. We found that Feifukang Mistura has obvious effects on pulmonary fibrosis in clinical practice and animal experiments...TGF-β1/Smad3 signal transmission and its relative miRNAs play important roles in pulmonary fibrosis. In previous studies, we found that Feifukang Mistura could down-regulat TGF-β1 expression and up-regulat let-7d in the lung tissue. In this project, we will further study the effects of Feifukang Mistura on TGF-β1/Smad3 signal transmission and its relative target genes, Smad3 relative miRNAs, and the feedback and regulation of miRNAs to TGF-β1/Smad3 transmission in vitro and in vivo by comprehensive use of western blot ,Laser scanning confocal and ChIP methods. Our study will explore the anti-pulmonary fibrosis mechanism of Feifukang Mistura and provide solid theoratical basis for the application of Chinese herbs.

肺纤维化是以肺泡结构紊乱为特征的一组疾病。其发病隐匿，预后极差，被世界卫生组织列为难治性疾病之一。肺纤维化属中医学的"肺痹"范畴，为本虚标实之症。肺复康合剂以黄芪为君药，配伍鱼腥草、川芎、丹参、地龙、甘草为臣药组方，经临床验证和动物实验有确切疗效。.TGF-β1/Smad3信号通路及其相关miRNAs是影响肺纤维化病程的关键因素，我们前期研究发现，肺复康合剂治疗大鼠肺纤维化，可显著下调肺组织中TGF-β1和上调肺组织中let-7d的表达。在此基础上，本项目拟综合运用Western blot、CHIP 、激光共聚焦等技术手段，在体内和体外研究肺复康合剂对TGF-β1/Smad3信号通路及其靶基因的作用、对Smad3相关miRNAs的影响、以及miRNAs对TGF-β1/ Smad3的反馈调节变化，深入解析肺复康合剂抗肺纤维化机理，为开发中医新药提供坚实的理论基础。

肺纤维化属于中医学“肺痹”、“咳嗽”等范畴，中医辨证属本虚标实证，虚多属肺脾气虚，实多为痰浊瘀毒互结。目前药物治疗以西药为主，主要包括糖皮质激素、免疫抑制剂、抗氧化剂等，然而这些化学药物的疗效不仅存在争议，而且还存在诸多不良反应。而取之于天然的中药制剂由于具有治疗与调理的双重作用，避免了化学药物的毒副作用，受到越来越多患者的欢迎。中药肺复康就是本课题组成员根据中医传统理论，结合现代医学观点，经临床反复药物筛选，取炙黄芪、丹参、鱼腥草、地龙、川穹、炙甘草等组方，提取加工后精制而成的具有完全自主产权的纯中药制剂。组方中黄芪益气扶正为君药，鱼腥草清热解毒，地龙、丹参、川穹活血化瘀通络为臣药，甘草祛痰解毒、调和诸药为佐使，故诸药相互配伍，通过益气扶正、解毒祛痰、化瘀通络达到防治肺纤维化的作用。 . 本项目系统研究了中药肺复康抗肺纤维化的临床疗效、药效物质基础和作用机制。通过双盲、随机、对照研究，临床上证实了肺复康能够减缓肺纤维化病人肺功能的恶化程度，增加病人6分钟步行试验最大步数，改善病人氧合指数，增加病人五年生存率，从而改善了病人的生存质量。本研究进一步采用高效液相色谱质谱联用技术，建立了鉴定肺复康中的化学成分及含量测定的方法，明确其主要活性成分和药效物质基础为新芒果苷、芒果苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、毛蕊异黄酮、五味子醇甲；含量测定研究中，上述5种成分分别在2.08-104.0 μg/mL、2.00-100.0 μg/mL、2.00-100.0 μg/mL、2.09-104.5 μg/mL、1.98-99.0 μg/mL，浓度范围内与各自峰面积呈良好的线性关系，平均加样回收率均在91.3%-103.8%。通过博来霉素诱发的实验性大鼠肺纤维化模型和TGF-β1诱发的细胞模型，利用网络药理学、高通量的芯片筛选以及基因干扰等技术研究了肺复康抗肺纤维化作用中非编码RNA特别是miRNA调控TGF-β1/Smad3信号通路的机制。. 该研究立项来源于临床诊疗中存在的实际问题，从临床中存在的问题延展到基础研究中寻找答案，又从基础研究中回到临床研究求证答案，具有较大的临床推广应用价值。