祛风通络方对阿霉素肾病大鼠足细胞骨架及裂孔膜的相关蛋白、信号通路影响的实验研究

中药对于慢性肾脏疾病的治疗有独到作用，基于我们前期的研究，证实祛风通络方对于慢性肾脏病（CKD）有明确疗效，但其治疗机理还研究不足。足细胞是肾小球滤过屏障中的重要一层，对CKD的研究有重要意义。在疾病发展中，肾小球足细胞会发生一系列的表型改变,最终导致肾小球硬化。上述过程中，主要表现为裂孔隔膜和细胞骨架的异常。裂孔隔膜和细胞骨架的关系非常密切，生理条件下，共同完成足细胞的功能、稳定足细胞的形态。病理条件下，他们互相影响，造成对足细胞形态的改变。所以，足细胞骨架及裂孔隔膜对于维持足细胞的正常结构及肾小球滤过屏障的完整功能起关键作用。本研究利用阿霉素大鼠肾病模型,研究在使用祛风通络方治疗前后细胞骨架相关蛋白和裂孔隔膜相关蛋白的表达，及对相关信号通路的影响，推测祛风通络方会通过影响足细胞相关信号通路而使相关蛋白的表达改变，进而改变足细胞的形态，阐明祛风通络方对阿霉素肾病大鼠治疗作用的可能原理。

足细胞是高度分化的细胞，它形成多重指突状的足突，相邻足突之间相互交联形成裂孔，覆盖一层裂孔隔膜，附于肾小球毛细血管基底膜的外侧。足细胞通过抵消肾小球基底膜的向外膨胀作用而稳定肾小球的结构。足细胞骨架结构是足细胞发挥正常功能的基础,在足细胞的运动、能量和信息传递等方面均起着重要作用。病理状态下,足细胞骨架结构无法进行适应性应变,将导致足细胞损害,甚至脱落,最终引起大量蛋白尿。因此研究足细胞骨架结构及裂孔隔膜蛋白对研究蛋白尿的发病机制有重要意义, 本研究利用大鼠阿霉素肾病模型,研究祛风通络方对肾小球足细胞骨架影响。应用western、RT-PCR技术蛋白研究祛风通络方对细胞骨架蛋白actinin-4 、synaptopodin和desmin及与细胞骨架重塑相关的Nephrin、podocin、CD2AP蛋白的表达影响。研究发现祛风通络方可降低AN大鼠尿蛋白排泄，改善蛋白质和脂质代谢，上调Synaptopodin mRNA、Nephrin mRNA、PodocinmRNA及蛋白的表达，不同程度的降低Desmin mRNA、a-actinin-4mRNA、CD2APmRNA及其蛋白的表达。改善足细胞及足突形态结构，起到保护及修复足细胞的功能。进而反证了慢性肾病中存在着“风伏肾络”的病机状态，以祛风通络立法和组方，取得了明显的治疗效果。