益气养阴消癥通络法对糖尿病肾病大鼠及高糖诱导足细胞的影响

Kidney is to assemble collaterals. "Pathogen usually intruding into collateral in protracted disease" is a center link of the development in renal disease.Under the theory of "Pathogen usually intruding into collateral in protracted disease", We proposed deficiency of both vital energy and yin and the collateral blood stasis for the basi-pathogenesis of diabetic nephropathy.We also proposed Qi Supplementing, Yin Nourishing, Blood Stasis Dispersing, Collateral Dredging (QYBC) for the therapeutic principle of diabetic nephropathy. We had known that QYBC had therapeutic action on DN by TGF-β/Smads, oxidative stress and RAS. The modern research indicated that podocyte and its slit membrane protein had the close correlation to proteinuric development. VEGF is the best powerful blood vessel permeation factor which raise the permeability of glomerular filtration for glomerular filtration and participate in the proteinuric development of DN. Therefore, this research view QYBC for podocyte and its slit membrane protein and VEGF signal transduction iteral influence by animal experiment, which provide theory evidence of modern medicine for traditional Chinese medicine compound preparation. Furthermore, to elucidate determination of treatment based in pathogenesis obtained throu-gh differentiation of symptoms and signs of raditional Chinese medicine use modern cell and molecular biology theory by QYBC research.

肾为络脉聚集之所，"久病入络"为肾脏病发展的中心环节之一。我们以"久病入络"理论为指导，提出气阴两虚、癥积络阻为糖尿病肾病（DN）基本病机，以益气养阴消癥通络为DN的治疗大法。而前期研究中我们已经证实该法能够通过对DN大鼠TGF-β/Smads、氧化应激及RAS系统的影响发挥对DN的治疗作用。现代研究表明，足细胞及其裂孔隔膜上的裂孔膜蛋白与蛋白尿的发生密切相关，而血管内皮生长因子(VEGF)是迄今所发现最强大的血管通透因子，能增加肾小球滤过屏障对血浆蛋白的通透性，其过表达参与了DN蛋白尿的发生。因此本研究继以DN动物模型、高糖培养足细胞为研究对象，从分子水平、组织水平和动物体内实验，观察益气养阴消癥通络法对DN足细胞及裂孔膜蛋白以及对VEGF信号转导通路的影响，为中药复方制剂延缓DN提供现代医学理论依据，而且通过该法防治DN的机理研究，将以现代细胞、分子生物学理论阐释传统中医的辨证论治。

糖尿病肾病（DN）是糖尿病患者最主要的并发症之一，以糖尿病为原发病的慢性肾脏病患者罹患更高的死亡率、心血管事件和肾衰竭的风险，现已成为导致终末期肾脏病的重要病因，因此，揭示本病的病理机制并早期防治对于延缓糖尿病肾病的进展意义重大。. 肾为络脉聚集之所，"久病入络"为肾脏病发展的中心环节之一。我们以"久病入络"理论为指导，提出气阴两虚、癥积络阻为DN基本病机，以益气养阴消癥通络为DN的治疗大法，取得了较好的临床疗效并探讨了部分作用机制。现代研究表明，足细胞及其裂孔隔膜上的裂孔膜蛋白与蛋白尿的发生密切相关，而血管内皮生长因子(VEGF)是迄今所发现最强大的血管通透因子，能增加肾小球滤过屏障对血浆蛋白的通透性，其过表达参与了DN蛋白尿的发生。因此本研究通过离体实验和动物体内实验，观察了益气养阴消癥通络法对DN足细胞及裂孔膜蛋白以及对VEGF信号转导通路的影响。1、益气养阴消癥通络中药对DN模型的干预作用：实验第24周末，正常对照组肾组织未见明显病理改变，与正常对照组相比，其余各组大鼠可见肾小球肥大，系膜区增宽，基质增加，肾小球基膜增厚，肾小囊腔变窄，24h尿蛋白显著升高，表明模型复制成功；中药治疗组病理改变较模型组轻、24h 尿蛋白明显减少，提示益气养阴消癥通络中药对DN具有肾保护作用。2、益气养阴消癥通络中药对DN模型裂孔膜蛋白的影响：模型组nephrin、podocin、CD2AP蛋白及mRNA显著下降，与模型组相比中药组能上调其表达,提示该药可能通过减少nephrin、podocin、CD2AP的丢失,使肾小球滤过膜的完整性得到一定程度的恢复而减轻蛋白尿。3、益气养阴消癥通络中药对DN模型VEGF信号通路的影响：模型组VEGF及Flt1的表达呈显著性升高，而与模型组相比中药组VEGF及Flt1的表达呈显著性下降，提示该药能够通过抑制该信号通路发挥对DN的治疗作用。4、通过高糖培养足细胞，以益气养阴消癥通络中药对其进行干预，中药血清刺激的小鼠足细胞nephrin、podocin、CD2AP蛋白及mRNA均较高糖组升高，而VEGF、Flt-1在蛋白水平和mRNA水平均较高糖组降低，证实了该药对髙糖培养足细胞裂孔膜蛋白的变化以及对VEGF信号转导通路的影响，从细胞水平探讨了该药对糖尿病肾病的确切治疗作用。