内皮抑素抗血管生成治疗在门静脉高压中的作用与分子机制研究

Angiogenesis is a physiopathologic hallmark of liver cirrhosis that is essential to develop and maintain portal hypertension, splanchnic hyperaemia and portosystemic collateralisation. VEGF-dependent angiogenesis plays a crucial part in this process, which means anti-angiogenic targeted therapy could be a new method for prevention or treatment of portal hypertension. Endostatin is one of the strongest and best angiogenesis inhibiting factor. In the present study, endostatin expression profiling in the internal organs and liver tissue was determined in animal models at different time points. The ability of exogenous endostatin overexpression by adenovirus-mediated gene transfer to inhibit angiogenesis, portosystemic shunting and expression of angiogenesis related factors were evaluated. The effect of endostatin in the development of splanchnic hyperaemia and portosystemic collateralisation, as well as the role of overexpression of exogenous endostatin for the treatment of anti-angiogenic targeted therapy and portal hypertension were also evaluated. The purpose of the present study was to reveal the role of endostatin in the angiogenesis process during portal hypertension and provide the research basis for molecular targeted therapy.

血管新生是肝硬化门静脉高压发生发展重要的病理生理学基础，内脏高动力循环和门体侧支血管形成受VEGF等多种促血管生长因子调控，以抗血管生成为目标的分子靶向治疗有望成为预防或治疗门静脉高压的新方法。内皮抑素是目前已知作用最强、效果最好的血管生成抑制因子。本项目建立门静脉高压大鼠模型，在不同时间点检测内脏、肝脏组织内皮抑素表达水平的动态变化和空间分布特征；并以门静脉高压形成的不同时间点，采用内皮抑素腺病毒过表达载体予以干预，检测大鼠内脏、肝脏组织新生血管数量、门体侧支分流率、血管生成相关因子表达水平等，探讨门静脉高压形成过程中，内皮抑素在内脏高动力循环和门体侧支血管形成中的作用，观察内皮抑素在门静脉高压形成不同阶段抗血管生成治疗、缓解门静脉高压的作用，并研究其分子机制。本研究将揭示内皮抑素参与门静脉高压血管新生的分子机制，为分子靶向治疗提供研究基础。

在肝硬化门静脉高压疾病发生发展中，血管新生是重要的病理生理学基础，同时VEGF等多种促血管生长因子调控着内脏高动力循环和门体侧支血管形成，其中以抗血管生成为目标的分子靶向治疗有望可能成为预防或治疗门静脉高压的新方法。内皮抑素作为目前已知作用最强、效果最好的血管生成抑制因子，其一直肿瘤血管内皮细胞生长的作用已经得到了广泛的认同，内皮抑素可通过抑制 VEGF 受体而阻止血管内皮细胞与 VEGF结合，抑制内皮细胞迁移；另外也能阻断金属蛋白酶 2，9 和 13 的活性，是多重的血管生成抑制剂，同时VEGF 介导血管新生不仅参与肝纤维化、肝硬化发生发展，也是内脏血管床扩张、门脉血流量增多、门体侧支循环建立重要的发病基础。本研究通过腹腔注射CCl4构建门静脉高压小鼠模型，利用内皮抑素腺病毒过表达载体（AD-endo）在门静脉高压形成不同时间予以干预，观察内皮抑素抑制门体侧支形成以及肝纤维化、肝硬化发生发展的作用，明确了内皮抑素可能通过PI3K/AKT-eNOS信号通路减少VEGF表达，从而改善肝内纤维化、炎症反应和病理性血管新生，减少肝实质损害。本课题研究探讨了内源性内皮抑素参与肝硬化门静脉高压血管新生的调控作用，首次采用 AD-endo 体内过表达内皮抑素，观察内皮抑素在门静脉高压肝内外血管新生、内脏高动力循环和门体侧支血管形成中的作用，并探讨了内皮抑素抑制血管新生中PI3K/AKT-eNOS信号通路发挥了重要作用，为肝硬化门静脉高压综合治疗提供新的方向，以及内皮抑素治疗肝硬化内静脉高压提供了理论基础和实验依据。