STIM-1/Orai-1-TRPC-1信号通路在高血压血管重构中的作用和意义

在我们前期发现SHR颈动脉重构时STIM1、TRPC1和NFATc3蛋白表达增加基础上，本项目拟进行SHR颈动脉重构和STIM1、Orai1、TRPC1和NFATc3表达、细胞内游离钙离子变化的研究。研究环孢素A、氨氯地平和替米沙坦干预SHR对颈动脉重构和上述蛋白表达的影响。研究SOCC、TRPC、NFAT抑制剂及siRNA分别静默TRPC1、STIM1和NFATc3基因等干预对培养的SHR颈动脉血管平滑肌细胞（VSMCs）STIM1、Orai1、TRPC1和NFATc3蛋白表达、细胞内钙离子、VSMCs增生及外基质变化的影响。论证STIM1、Orai1、TRPC1上调致细胞钙离子内流增加而引起VSMCs增生及外基质改变是SHR颈动脉重构的主要机制，而STIM1/Orai1-TRPC1-NFATc3是主要信号通路的假说。为高血压及血管重构的防治提供新理论和治疗新靶点，具有重要意义。

血管重构是高血压靶器官损害的表现，是高血压维持和恶化的结构基础，血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖是其主要病理过程。研究发现持续缓慢上升的细胞内钙离子浓度是细胞增殖的关键，STIM1/Orai1-TRPC1通路控制钙离子内流，下游信号分子NFATc3调节Ca2+依赖性基因转录（即兴奋-转录偶联），在血管平滑肌细胞增殖中起重要调控作用。.目的：本课题动态研究SHR颈动脉重构发生、发展时和体外培养SHR颈动脉来源VSMC增殖时STIM1/Orai1-TRPC1和下游信号NFATc3的表达情况以及VSMC内[Ca2+]i水平，探讨上述钙离子通道相关蛋白在颈动脉重构中的作用。.结果：1. 筛选SHR颈动脉重构时TRPC优势亚型：SHR颈动脉组织染色和颈动脉环试验从形态学和功能学上确定18周龄SHR颈动脉发生重构时TRPC表达增强；采用Real-time PCR和Western blot方法检测发现SHR颈动脉重构的发生与发展时TRPC1和TRPC6表达上调。.2. AngⅡ促增殖的SHR颈动脉来源VSMC，TRPC1 、STIM1、Orai1和NFATc3表达增加，激光共聚焦检测[Ca2+]i升高；VSMC的WST-1代谢活性和BrdU 掺入DNA合成明显升高，细胞增殖明显；通道抑制剂可使[Ca2+]i下降，抑制细胞增殖。. 3.CosA以及siRNA沉默STIM1、Orai1和TRPC1可显著降低AngⅡ促增殖的SHR颈动脉来源VSMC的WST-1代谢活性和BrdU 掺入DNA合成，抑制VSMC增殖，降低[Ca2+]i。4. CosA处理SHR虽无明显降压效果但可减轻颈动脉重构，可能与减少SHR颈动脉组织TRPC1、STIM1、Orai1 和/或NFATc3表达有关。.结论： SHR颈动脉重构随周龄增加、血压升高而加重；STIM1/Orai1-TRPC1通路和下游信号NFATc3与SHR颈动脉重构的发生与发展相关；抑制该通路可减轻SHR颈动脉重构。