富硒女贞子防治奶牛热应激分子机理

中兽医学认为奶牛热应激属阳盛阴虚病证，治宜滋阴清热，女贞子为滋阴补肾之品，而富硒女贞子对应激性免疫调节失衡和自由基暴发性损伤具有显著疗效，其主治与奶牛热应激病机相符，故欲开展此项研究。本项目经富硒女贞子生产及质量控制、模型小鼠及奶山羊的热应激防治予试和奶牛热应激的防治试验，通过观察受试动物临床体症、生产性能、血液生化及氧自由基代谢相关酶活性、热应激蛋白含量等热应激相关生理病理性检测指标的观察，来探寻对奶牛热应激具有明显防治作用的富硒女贞子有效部位群或主要成分；再经奶牛外周血淋巴细胞和卵泡细胞热应激诱导培养试验，实时定量PCR等检测技术，观察淋巴细胞中活性氧浓度、HSP70的mRNA、瘦素基因及其受体基因的表达量；卵泡细胞中胆固醇受体mRNA、脂蛋白受体蛋白-8的表达量和细胞凋亡情况，来探索其抗热应激的分子机理，最终为防治奶牛热应激的富硒女贞子新型中兽药制剂的申报、开发打下基础。

根据项目研究计划，确立了富硒女贞子的培养方式及建立了原子吸收光谱测定法和红外指纹图谱鉴定法的质量控制方法，并进行了富硒女贞子的大规模生产。研究表明，在女贞树盛花期间按照50 mL/M2喷施400 mg/L亚硒酸钠水溶液施肥2次（隔周），可生产Se含量为1.88 μg/g的富硒女贞子药材。通过富硒女贞子对模型动物（小鼠）热应激防治试验得出，富硒女贞子对小鼠热应激具有显著的防治作用，其中0.75 g/kg体重的给药剂量组效果最佳。通过富硒女贞子对山羊、奶牛热应激防治试验得出，在山羊、奶牛日粮中分别按10 g/头/d、40 g/头/d，每旬3 d添加富硒女贞子，可显著缓解山羊、奶牛热应激期间产奶量下降作用，富硒女贞子组较热应激山羊组、奶牛组的产奶量均提高15%以上（p＜0.05），且乳脂肪、乳蛋白含量均显著提高。通过体外富硒女贞子及其有效成分（硒蛋白、硒多糖和齐墩果酸）对山羊/奶牛外周血淋巴细胞、优势卵巢细胞、乳腺上皮细胞热应激的影响研究得出，富硒女贞子通过提高卵巢细胞活力、减少其凋亡，改善动物热应激期间的丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA）的反应，降低HSP70的表达，从而提高机体抗氧化能力、免疫力，最终达到提高乳腺上皮细胞活力、减少其凋亡而增加产奶量的作用。