应用家族性AD患者原代成纤维细胞研究PS1 Val97Leu突变的发病机制

人口老龄化已经使老年痴呆成为严重的社会负担，近年来针对家族性阿尔茨海默病遗传学与分子生物学的研究为其治愈提供了潜在的治疗靶点。本课题组在一个早发家族性中国人AD家系中鉴定出一个新的早老素1（PS1）基因突变：PS1 Val97Leu突变。初步的功能研究已经证实了其对APP剪切和细胞凋亡的影响。近年来的研究提示非APP途径，包括tau蛋白和自噬异常在AD的发病机制中也发挥着关键作用，而PS1突变-tau蛋白过磷酸化-自噬功能异常通路可能是AD发病机制的一个重要途径。.本研究将首先建立该AD家系原代成纤维细胞库，并以此为模型研究PS1 Val97Leu突变对tau蛋白磷酸化和自噬及其上游信号通路的影响。然后通过构建表达拟过磷酸化tau蛋白的AAV2载体，我们将探讨tau蛋白功能异常对自噬的影响，验证PS1突变-tau蛋白过磷酸化-自噬异常假说在AD发病机制中的作用。

人口老龄化已经使老年痴呆成为严重的社会负担，针对家族性阿尔茨海默病遗传学与分子生物学的研究为其治愈提供了潜在的治疗靶点。近年来的研究提示非APP途径，如自噬异常在AD的发病机制中也发挥着关键作用，而自噬水平与AD患者认知障碍程度的关系仍不确定。.本研究首先招募了11名阿尔茨海默病患者和2名健康老年人作为对照。阿尔茨海默病患者的诊断依据国际通用的DSM-IV诊断标准，所有入组的患者均满足NINCDS-ADRDA的阿尔茨海默病诊断标准。所有入组患者均采用临床痴呆评定量表（CDR）来评估痴呆的严重程度，并通过世界卫生组织-加州大学洛杉矶分校听觉词语学习测验(WHO-UCLAAVLT)量表来评估患者的言语记忆，通过画钟试验（CDT）来评估患者的视空间能力。.入组的患者经皮肤活检后取得皮肤组织，进而进行原代成纤维细胞培养。在原代成纤维细胞扩增至第四代至第五代时，收集部分原代成纤维细胞，提取蛋白，进行自噬功能的检测。将原代成纤维细胞分别正常培养和营养剥夺培养，继而进行电镜观察和自噬水平（LC3-II/LC3-I比值）的检测。研究结果显示在正常培养条件下，AD患者和正常对照的自噬水平没有显著差异，但在饥饿诱导条件下，自噬水平在AD患者中显著升高。进一步的相关性分析显示，认知障碍程度越重的AD患者，其自噬水平越高，记忆力越差的AD患者，其自噬水平越高，提示自噬水平与AD患者的认知障碍程度和记忆力损害程度呈正相关。这是国际上首次针对自噬功能与AD患者认知障碍程度和认知域的相关性开展的研究。.本研究发表第一作者SCI文章三篇，非第一作者SCI文章一篇，核心期刊文章一篇，另有一篇英文文章正在投稿中。