滋养细胞通过分泌TSLP介导蜕膜γδT细胞免疫调节功能

我们新近研究发现，人滋养细胞通过分泌TSLP调节蜕膜γδT细胞功能，那么受调控的γδT细胞在母-胎界面又发挥怎样的免疫调节功能？本项目通过构建体外细胞共培养体系，分析滋养细胞分泌的TSLP对蜕膜γδT细胞凋亡、增殖、活化表型、趋化因子受体表达、杀伤抑制性受体表达、细胞因子分泌及细胞毒效应的调节作用及信号通路；探讨被TSLP调控的γδT细胞能否诱导CD4+CD25-T 细胞向CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞分化，以期解析妊娠期调节性T细胞扩增的机制；借助小鼠妊娠模型，通过早孕期过继转输γδT细胞，观察其在宿主鼠体内的归巢，及对宿主鼠外周和母-胎界面局部细胞因子表达、免疫耐受状态、免疫细胞比例变化的影响，以进一步验证TSLP通过调节γδT细胞从而诱导母-胎免疫耐受的体内调节机制，为TSLP改善妊娠预后的临床潜在应用提供科学依据，并对防治一系列妊娠并发症具有重要的理论意义及应用价值。

生理妊娠类似于同种异体移植，作为同种移植物的胚胎在母体内存活直至分娩，反映母体对胚胎的免疫耐受，母体对胚胎产生免疫排斥则导致妊娠失败。胚胎来源的滋养细胞与母体来源的蜕膜基质细胞和免疫活性细胞是母胎界面主要功能细胞，这些细胞之间的协调对话可能在正常妊娠的建立和维持中发挥重要的作用。本研究通过建立人早孕蜕膜γδT细胞和滋养细胞共培养体系，以阐明蜕膜γδT细胞与滋养细胞之间的相互调节机制。结果表明：1）正常早孕妇女外周血与蜕膜局部γδT细胞数量比正常未孕妇女及自然流产患者均明显增多，并且蜕膜γδT细胞比例明显高于外周血。蜕膜γδT细胞是CD4- 和CD8- 双阴性细胞。γδT细胞高水平表达TGF-β和IL-10，低水平表达TNF-α和INF-γ，几乎不表达IL-2和IL-4。这些结果提示，孕妇体内γδ T细胞数量增多，且蜕膜γδT细胞产生大量调节性细胞因子，在蜕膜局部形成Th2型优势的免疫微环境，从而有利于母-胎耐受的形成。2）蜕膜γδT细胞主要通过分泌IL-10促进滋养细胞增殖和侵袭，以及抑制滋养细胞凋亡。因此，γδT细胞可改善滋养细胞的生物学行为，有利于胎盘的形成。3） 人早孕期，滋养细胞通过分泌CXCL16促进蜕膜γδT细胞增殖，并产生TGF-β和IL-10增多，形成一个利于妊娠的良性循环；滋养细胞通过分泌CXCL16下调蜕膜γδT细胞颗粒酶B的水平，降调节γδT细胞对胚胎组织的损伤作用，从而维持正常妊娠。4）蜕膜T细胞表达TSLPR和IL7Rα。相比较CD4+ 和CD8+ T细胞，早孕期蜕膜γδT细胞较高表达TSLP受体。这些结果提示TSLP可能对蜕膜局部γδT 细胞发挥调节作用。5）胚胎来源的滋养层细胞分泌TSLP，通过活化STAT3途径而下调Caspase 3表达，进而抑制蜕膜γδT细胞凋亡。6）TSLP诱导人滋养细胞侵袭。TSLP明显下调滋养细胞中NME1的表达，State3途径，而不是Stat5途径，参与TSLP调控的NME1表达。TIMP1的表达明显下降在knockdown of NME1细胞株。结果提示TSLP通过活化STAT3途径而下调NME1表达，进而影响TIMP1的表达，从而促进滋养细胞侵袭。7）TSLP通过STAT3途径介导c-Myc表达上调，从而促进滋养细胞增殖。本项目为TSLP 改善妊娠预后的临床潜在应用提供科学依据。