人早孕蜕膜基质细胞调节滋养细胞浸润功能的分子机制

滋养细胞具有类似肿瘤细胞的浸润能力，但与肿瘤不同，其浸润是有节制的正常生理行为。以往研究表明人早孕蜕膜条件培养液能抑制滋养细胞浸润，而我们在前期研究中发现除抑制作用外还具有促进作用：低浓度的蜕膜基质细胞条件培养液（DSCM）可促进滋养细胞浸润及基质金属蛋白酶（MMP）表达，而高浓度则起抑制作用，可见蜕膜细胞在调控滋养细胞有节制的浸润行为方面发挥着重要作用。本项目拟在前期研究基础上筛选DSCM中对滋养细胞浸润发挥作用的促进因子（PF）与抑制因子（IF）：首先将DSCM分别热处理、酶处理或超滤后检测其是否影响细胞浸润与MMP-2表达，根据热稳定性、氨基酸类型与分子量范围初步筛选PF与IF；然后应用亲和色谱等多种蛋白质分离纯化技术逐步剔除对滋养细胞浸润无影响的蛋白纯化液，进一步分离PF与IF；最后应用质谱鉴定PF与IF的蛋白种类与性质并验证其功能，以期阐明DSCM调节滋养细胞有节制浸润的分子机制

滋养细胞具有类似肿瘤细胞的浸润能力，但与肿瘤不同，其浸润是有节制的正常生理行为。以往研究表明人早孕蜕膜条件培养液能抑制滋养细胞浸润，而我们在前期研究中发现除抑制作用外还具有促进作用：低浓度的蜕膜基质细胞条件培养液（DSCM）可促进滋养细胞浸润及基质金属蛋白酶（MMP）表达，而高浓度则起抑制作用，可见蜕膜细胞在调控滋养细胞有节制的浸润行为方面发挥着重要作用。本项目在前期研究基础上筛选了DSCM中对滋养细胞浸润发挥作用的促进因子（PF）与抑制因子（IF）：首先将DSCM分别热处理、酶处理或超滤后检测其是否影响滋养细胞浸润，根据热稳定性、氨基酸类型与分子量范围初步筛选PF与IF；然后应用多种蛋白质分离纯化技术进一步分离PF与IF，采用蛋白芯片鉴定PF与IF；最后，研究了病理性妊娠（子痫前期、胚胎停育）与微小RNA、浸润相关因子的关系，为探讨病理性妊娠的发病机制提供了实验依据。.结果显示：.1. 蜕膜基质细胞条件培养液DSCM对B6Tert细胞、HTR-8细胞、JEG-3细胞的浸润能力均具有浓度依赖性影响，低浓度的DSCM可促进滋养细胞浸润及基质金属蛋白酶（MMP）表达，而高浓度则起抑制作用。.2. 560C与1000C加热处理DSCM后，DSCM促进了滋养细胞的浸润功能，说明IF不能耐受560C与1000C的温度，高温加热后，IF有可能发生了变性，而PF对浸润功能起了主导作用。酶处理与超滤离心后DSCM对HTR-8的浸润能力的影响无显著差异。.3. 我们通过刀豆素A（ConA）亲和色谱、离子交换色谱及凝胶过滤色谱对浸润相关蛋白（PF与IF）进行分离纯化，发现部分PF为非糖蛋白，分子量约为65-75Kd。部分IF为非糖蛋白，分子量约40-50Kd。.4. 我们采用蛋白芯片技术对不同浓度的DSCM处理滋养细胞后的细胞上清及细胞蛋白分别进行了蛋白芯片检测分析，发现了血管生成素（Ang）等一系列滋养细胞浸润相关蛋白和Toll样受体信号转导通路（Toll-like receptor signaling pathway）等相关作用通路。.5. 研究了病理性妊娠（子痫前期、胚胎停育）与微小RNA、浸润相关因子的关系。