戊型肝炎病毒ORF2蛋白与宿主细胞蛋白的相互作用及其生物学意义

戊型肝炎病毒（HEV）是我国急性肝炎的常见病原。因HEV不能在细胞培养中大量繁殖，限制了对HEV的基础研究，故目前缺乏对该病毒进入细胞等复制过程的知识。基于病毒复制首先是病毒与细胞相互作用这一经典原理，本研究利用近似于天然HEV外壳结构（ORF2蛋白）多肽，通过荧光显微镜技术和流式细胞术研究ORF2蛋白与肝癌细胞株的结合特性，确定其结合功能域。然后以结合功能域蛋白多肽作为诱饵蛋白，利用酵母双杂交体系和pull-down实验等分离肝细胞中能与该多肽发生作用的蛋白成分，综合利用双向电泳、蛋白质谱和免疫转印分析，确定这种（些）细胞蛋白的性质。进一步用RNAi技术将肝细胞中相关的基因沉默，或将相关基因导入不能与ORF2蛋白结合的细胞株，使相应蛋白在细胞膜上表达，观察这些细胞与ORF2多肽结合的量变，阐明这种（些）蛋白在HEV进入细胞中的生物学作用。该研究对理解HEV进入细胞的机理具有重要意义。