STIM1,Orai1和TRPC1介导的SOC对人肝癌细胞增殖的影响

细胞内钙离子参与调控肿瘤细胞生长，但钙离子进入肿瘤细胞的途径尚不十分清楚。细胞钙池操纵的钙通道（SOC）研究新近取得突破性进展，但其分子组成和作用机制尚需深入探讨。本项目基于我们前期有关STIM1、Orai1和TRPC1在肝细胞SOC功能研究中的重要发现，拟应用RNAi、膜片钳记录、单细胞RT-PCR、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等先进技术和方法，首先进一步拓展研究肝癌细胞较正常肝细胞的SOC功能改变，进而探讨STIM1、Orai1和TRPC1基因在肝癌细胞的表达情况，继之研究三种基因改变对肝癌细胞SOC功能的影响，最后研究三种基因介导的SOC功能改变对肝癌细胞增殖能力和增殖周期的影响，以期发现三种基因相互协调对肝癌细胞SOC功能发挥具有关键作用，SOC调控的钙离子内流对肝癌细胞增殖具有控制作用，旨在为肝癌细胞的SOC分子组成及作用机制探讨提供实验依据，并为肝癌的发生机制研究提供新的方向。

肝癌是我国第二常见的癌症，全球50 %以上的肝癌发生在我国，深入探讨肝癌的发生、发展机制，并积极探索其早期防治的有效措施，是一项十分紧迫的医学研究热点和难点问题，本项目探讨STIM1、Orai1和TRPC1介导的钙池操纵的钙通道（SOC）对人肝癌细胞增殖的影响。方法：应用RNAi、膜片钳记录、单细胞RT-PCR、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等技术和方法，研究肝癌细胞较正常肝细胞的SOC功能改变，STIM1、Orai1和TRPC1基因在肝癌细胞的表达情况，三种基因改变对肝癌细胞SOC功能的影响，三种基因介导的SOC功能改变对肝癌细胞增殖能力和增殖周期的影响。结果：全细胞膜片钳结果提示人肝癌细胞的SOC电流密度为19.36±4.99 pA/pF，明显高于人正常肝细胞的电流密度8.90±2.78 pA/pF；钙成像技术提示人肝癌细胞的细胞内钙荧光强度增加31.81±8.89%，明显高于人正常肝细胞的21.58±6.01%；MTT生长曲线显示人肝癌细胞的增殖能力明显高于人正常肝细胞；流式细胞仪研究提示人肝癌细胞的S期细胞比例、增殖指数明显大于人正常肝细胞。肝癌细胞较正常肝细胞的SOC功能增强，与SOC通道功能密切相关的三种蛋白Orai1、STIM1、TRPC1表达水平在人肝癌细胞较肝细胞明显增加，人肝癌细胞的增殖能力相较于人正常肝细胞有明显增强，SOC调控的钙离子内流对肝癌细胞增殖具有控制作用，STIM1、Orai1和TRPC1基因相互协调对肝癌细胞SOC功能发挥具有关键作用。结论：STIM1、Orai1和TRPC1介导的SOC对人肝癌细胞增殖具有重要作用，这为肝癌细胞的SOC分子组成及作用机制探讨提供实验依据，并为肝癌的发生机制研究提供新的方向。